[发明专利]一种对核苷酸酶解液进行脱色的方法

说明书

技术领域

本发明属于5’-核苷酸的分离纯化领域，具体涉及超高交联树脂SX-01在核苷酸酶解液脱色中的应用。

背景技术

核苷、核苷酸是构成生物遗传信息DNA和RNA的基础，在生物细胞的物质代谢和能量转换中起着重要作用。5’-单核苷酸及其衍生物在遗传工程、医药、食品、农业生产及科研领域有着十分重要的用途。在保健品、婴幼儿食品中添加核苷酸有利于人体补充核苷酸，使核苷酸代谢处于旺盛状态，可以达到抵抗衰老、延长人体寿命、提高人体免疫功能及治疗疾病的目的；在农业方面，核苷酸作为植物生长刺激剂利用潜力很大，实验证明，核苷酸能提高种子内含物的转化能力、出苗率和苗的质量，促进植物根系的生产，并能加深叶色，提高叶绿素含量；在化妆品方面，由于核苷酸具有促进蛋白质合成的作用，核苷酸制品在化妆行业的应用也很广泛，可添加于洗涤剂、乳化剂、雪花膏、乳液、戏剧化妆品中，能够促进皮肤的新陈代谢、具有防皱、生肌保湿、控制皮脂分泌、阻止紫外线吸收、使皮肤柔软的作用，对雀斑、荞麦皮肤、青春痘香港脚等各种皮肤病都能发挥极强的渗透力，治疗效果显著。

核苷酸的生产方法主要有4种：化学合成法、RNA酶解法、微生物发酵法及生物催化法，其中酶解法是国内外核苷酸生产所用的主要技术。但是在RNA酶解液中含有大量色素，如果不经预处理直接用树脂分离，尽管树脂会过滤掉一部分杂质，但还是会有很大一部分色素残留于核苷酸的洗脱液中，对核苷酸的后分离和结晶工序都带来很大的压力，影响核苷酸产品的纯度和色度，而且被吸附于树脂上的色素会造成树脂不同程度的毒化，从而降低树脂的重复利用率。因此有必要除去酶解液中的色素，从而减轻下游分离的压力。

目前对核苷酸酶解液脱色的研究较多，其中张剑秋公开了申请号为200510094493.0的专利《酶法生产核苷酸的工艺》，使用酸性脱色树脂对核苷酸酶解液进行了脱色；大连珍奥生物技术有限公司公开了申请号为200810228964.6的专利《高纯度5’-核苷酸的生产新工艺》，使用活性炭粉末对酶解后的核苷酸进行了脱色；肖林平的论文《5’-尿苷酸分离纯化工艺的研究》中使用超滤膜超滤酶解液然后再使用活性炭粉末对酶解液进行脱色。但是，酸性脱色树脂再生的过程中要消耗大量的酸，活性炭回收较难，而且酸性脱色树脂和活性炭对核苷酸都有少量的吸附，会损失一部分核苷酸，而本发明所使用的超高交联度树脂SX-01对四种核苷酸吸附较少，而且脱色效果较好，脱色率较高，再生工艺简单，再生剂消耗量较少。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种对核苷酸酶解液进行脱色的方法。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

一种对核苷酸酶解液进行脱色的方法，将核苷酸酶解液通过超高交联树脂SX-01进行色素吸附，吸附饱和后，超高交联树脂SX-01利用再生剂进行再生；

其中，所述的超高交联树脂SX-01具有如下结构单元：

该树脂的骨架为聚苯乙烯，平均粒径为0.3～1mm，含水量为32%～49%，孔径为1.5～4nm，最可几孔径为1.8nm，平均比表面积为950～1800m²/g，平均孔容为0.54～0.82cm³/g。该结构单元是通过图1的红外分析光谱分析得出：3100-3200cm^-1处为N-H的伸缩振动吸收峰，2900-3000cm^-1处为C-H的伸缩振动吸收峰；1500-1670cm^-1处为苯环的骨架振动峰；1395cm^-1处为C-N的伸缩振动吸收峰。

所述的超高交联树脂SX-01的制备方法为：将氯甲基化聚苯乙烯树脂在3～8倍重量的邻硝基乙苯中充分溶胀，溶胀后搅拌加入2～5倍氯球重量的胺化试剂，再加入10～30%氯球重量的三氯化铁作傅氏催化剂，在100～150℃进行Friedel-Crafts后交联反应，当树脂残余氯含量为1～3%时停止反应，反应结束后冷却滤出树脂球体，用乙醇、蒸馏水洗涤，真空干燥后制得超高交联树脂SX-01。

其中，所述的核苷酸酶解液是用核酸酶p1酶解RNA粉末得到。制备过程如下：

(1)配制pH=5.5的6%RNA溶液600ml：先用1mol/l的NaOH溶液将600ml去离子水pH调至13左右，然后加入RNA粉末（36g）进行溶解，再用1mol/l的NaOH调pH至5.5，置于70℃水浴锅中预热至70℃。