[发明专利]一种全新高效的大花蕙兰组织培养快速繁殖方法

说明书

技术领域

本发明涉及大花蕙兰的快速繁殖方法，属于植物的人工繁殖和栽培方法技术领域。

背景技术

大花蕙兰(Cymbidium grandiflorium)，又名喜姆比兰，是兰科(Orchidaceae)兰属多年生草本植物。其来源是兰属中的大花附生种、小花垂生种以及一些地生兰经过一百多年的多代人工杂交育成的品种群。叶长碧绿，花姿粗犷，豪放壮丽，是世界著名的“兰花新星”。具有国兰的幽香典雅，又有洋兰的丰富多彩，在国际花卉市场十分畅销，深受花卉爱好者的倾爱。然而，大花蕙兰的生产企业也越来越多，市场竞争很激烈。这就要求要不断有新的品种产生，以在竞争中取得优势。然而，传统的育种技术无法解决大花蕙兰生长周期长，花型、花色、花香等一些优良性状难以保持，抗病、逆性能力较低等问题。

市场销售的大花蕙兰苗的生产几乎都来源于组织培养技术繁殖，采用该种方法生产高品质的种苗，为满足市场对于大花蕙兰的需求提供了一条有效的途径。国内外对于大花蕙兰的组织培养技术均有研究，尤其国外开展此方面的研究较早，是第一个进行兰花工厂化生产的种类；国内近年来也有少数开展组培的花卉生产公司进行了大规模生产和专利申请的报道。然而，迄今为止，大花蕙兰的组织培养均为以带有生长点的新芽为外植体，诱导拟原球茎，从而诱导植株实现再生，繁殖系数低。因此，为了解决以上问题，本发明提供了一种全新高效的大花蕙兰组织培养快速繁殖方法。经过愈伤组织培养这一阶段，极大的提高了大花蕙兰的繁殖系数。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高效的大花蕙兰快速繁殖方法，以实现大花蕙兰的规模化快速生产并为以组培为关键技术其他方面的研究工作奠定基础。

本发明的技术方案如下，该种大花蕙兰快速繁殖方法的主要特点是：

A外植体消毒：选取新抽出的新叶，从基部将叶片剪下，用0.1％的安利洗涤液在摇床上震荡洗涤5～10min；流水冲洗10～20min后，置于在超净工作台上用75％的酒精漂洗30s；无菌水清洗4遍后，用含0.1％升汞灭菌5～15min；无菌水冲洗4～5遍，最后用无菌滤纸吸干表面水分。

B愈伤组织诱导：将消毒好的大花蕙兰叶片切成1.0-1.5cm的片段，接种到以下培养基中：WPM基本培养基，蔗糖(食用糖)20～40g/L，植物生长激素0.1～2.0mg/L，适当pH值；培养温度28±1℃，光照强度1000～3000lx，光照时间10～16h，进行光照培养；

C不定芽诱导：将诱导得到的愈伤组织接种到以下培养基中：WPM基本培养基，蔗糖(食用糖)20～40g/L，植物生长激素0.2～2.0mg/L，适当pH值；培养温度28±1℃，进行光照培养30～40天

D继代培养增殖：获得的不定芽在超净台上将其叶剪短，置于1/2WPM或WPM基本培养基，植物生长激素0.1～2.0mg/L，蔗糖(食用糖)20～40g/L，适当pH值，进行培养增殖。

E生根培养：选取健壮的试管苗，经过修剪后，接种到如下培养基中：1/2MS或WPM基本培养基，，植物生长激素0.2～2.0mg/L，蔗糖(食用糖)20～40g/L，适当pH值，进行光照培养30～40天。

F炼苗移栽：将组培瓶盖打开，并添加10～20ml的蒸馏水，进行有菌条件驯化2-3d；用镊子将组培苗从瓶中取出，移栽到已经灭菌的栽培基质中，进行遮阴驯化3周，期间不定期的喷施1/2MS营养液。

所述的全新高效大花蕙兰组织培养快速繁殖方法的延伸技术方案包括：步骤A中的消毒试剂和时间、步骤B中的pH值范围以及步骤B、C、D和E中大花蕙兰组织培养快速繁殖方法所述的培养基中涉及的植物生长激素，包括6-卞基腺嘌呤(6-BA)、2，4-二氯苯氧基乙酸(2，4-D)、萘乙酸(NAA)、激动素(KT)其中一种或几种。

所述的全新高效大花蕙兰组织培养快速繁殖方法的延伸技术方案包括：步骤A中的种子消毒用试剂0.1％的安利洗涤液在摇床上震荡洗涤5～10min和含0.1％升汞灭菌5～15min。

所述的全新高效大花蕙兰组织培养快速繁殖方法的延伸技术方案包括：步骤B、C、D和E中pH值范围为5.8～7.0。

所述的全新高效大花蕙兰组织培养快速繁殖方法的延伸技术方案包括：其特征在于步骤B所涉及到的植物生长激素包括为NAA0.1～0.5mg/L，6-BA0.2～1.0mg/L，2，4-D1.0～3.0mg/L。