[发明专利]一种全新高效的大花蕙兰组织培养快速繁殖方法

权利要求书

1.本发明所述全新高效大花蕙兰组织培养快速繁殖方法，其特征在于：

A外植体消毒：选取新抽出的新叶，从基部将叶片剪下，用0.1％的安利洗涤液在摇床上震荡洗涤5～10min；流水冲洗10～20min后，置于在超净工作台上用75％的酒精漂洗30s；无菌水清洗4遍后，用含0.1％升汞灭菌5～15min；无菌水冲洗4～5遍，最后用无菌滤纸吸干表面水分。

B愈伤组织诱导：将消毒好的大花蕙兰叶片切成1.0-1.5cm的片段，接种到以下培养基中：WPM基本培养基，蔗糖(食用糖)20～40g/L，植物生长激素0.1～2.0mg/L，适当pH值；培养温度28±1℃，光照强度1000～3000lx，光照时间10～16h，进行光照培养；

C不定芽诱导：将诱导得到的愈伤组织接种到以下培养基中：WPM基本培养基，蔗糖(食用糖)20～40g/L，植物生长激素0.2～2.0mg/L，适当pH值；培养温度28±1℃，进行光照培养30～40天

D继代培养增殖：获得的不定芽在超净台上将其叶剪短，置于1/2WPM或WPM基本培养基，植物生长激素0.1～2.0mg/L，蔗糖(食用糖)20～40g/L，适当pH值，进行培养增殖。

E生根培养：选取健壮的试管苗，经过修剪后，接种到如下培养基中：1/2MS或WPM基本培养基，，植物生长激素0.2～2.0mg/L，蔗糖(食用糖)20～40g/L，适当pH值，进行光照培养30～40天。

F炼苗移栽：将组培瓶盖打开，并添加10～20ml的蒸馏水，进行有菌条件驯化2-3d；用镊子将组培苗从瓶中取出，移栽到已经灭菌的栽培基质中，进行遮阴驯化3周，期间不定期的喷施1/2MS营养液。

2.根据权利要求1所述的大花蕙兰组织培养快速繁殖方法，其特征在于步骤A中的消毒试剂和时间、步骤B、C、D和E中大花蕙兰组织培养快速繁殖所述的培养基中涉及的pH值范围和植物生长激素，包括6-卞基腺嘌呤(6-BA)、2，4-二氯苯氧基乙酸(2，4-D)、萘乙酸(NAA)、激动素(KT)其中一种或几种。

3.根据权利要求1所述大花蕙兰组织培养快速繁殖方法，其特征在于步骤A中的种子消毒用试剂0.1％的安利洗涤液在摇床上震荡洗涤5～10min和0.1％升汞灭菌5～15min。

4.根据权利要求1所述的大花蕙兰组织培养快速繁殖方法，其特征在于步骤B、C、D和E中所涉及到的pH值范围为5.8～7.0。

5.根据权利要求1所述的大花蕙兰组织培养快速繁殖方法，其特征在于步骤B中所涉及到的植物生长激素包括，NAA0.1～0.5mg/L，6-BA0.2～1.0mg/L，2，4-D1.0～3.0mg/L。

6.根据权利要求1所述的大花蕙兰组织培养快速繁殖方法，其特征在于步骤C中所涉及到的植物生长激素包括，NAA0.1～0.5mg/L，KT1.0～3.0mg/L。

7.根据权利要求1所述的大花蕙兰组织培养快速繁殖方法，其特征在于步骤D中所涉及到的植物生长激素包括，NAA0.1～0.5mg/L，6-BA0.2～1.0mg/L。

8.根据权利要求1所述的大花蕙兰组织培养快速繁殖方法，其特征在于步骤E中所涉及到的植物生长激素为NAA0.2～1.0mg/L。

9.根据权利要求1所述的大花蕙兰组织培养快速繁殖方法，其特征在于步骤F中添加蒸馏水10～20ml，进行有菌驯化2-3天。