[发明专利]表达铁纳米颗粒以及温度敏感通道的病毒AAVMTF及用途

权利要求书

1.一种表达铁纳米颗粒以及温度敏感通道的病毒AAVMTF，其特征在于，它包括表达温度敏感通道的病毒AAVMTF1和表达铁纳米颗粒的病毒AAVMTF2，其中，所述病毒AAVMTF1通过以下方法制备得到：首先进行目的片段构建设计：TRPV1构建在CMV启动子下游，mCherry报告基因克隆于TRPV1通道下游，在mCherry和TRPV1之间有一个2A自身裂解片段，从而实现TRPV1和mCherry的非融合共表达；然后进行病毒AAVMTF1的包装：腺相关病毒经过表达、包装和包埋带有目的片段的质粒后，转染到HEK293T细胞系中，使其充分表达并形成病毒颗粒；48小时后将培养基收集，用多步离心法进行病毒颗粒的纯化和浓缩，最后将病毒溶解在灭菌的PBS中，分装并储存于-80℃备用，从而得到病毒AAVMTF1，该病毒AAVMTF1具有SEQ ID NO.1所示的基因序列；所述病毒AAVMTF2通过以下方法制备得到：首先进行目的片段构建设计：小鼠铁蛋白重链与小鼠铁蛋白轻链之间用一个可变链接区进行克隆，形成铁蛋白轻链-连接体-重链融合蛋白，在铁融合蛋白上游有段信号肽，在其下游是血小板源生长因子受体跨膜段PDGFR-TM，在信号肽的作用下PDGFR-TM可将铁融合蛋白锚定在膜上，EGFP报告基因克隆于PDGFR-TM下游，在PDFGR-TM和EGFP之间有一个2A自身裂解片段，从而实现锚定在膜上的铁融合蛋白和EGFP的非融合共表达，然后进行病毒AAVMTF2的包装：腺相关病毒经过表达、包装和包埋带有目的片段的质粒后，转染到HEK293T细胞系中，使其充分表达并形成病毒颗粒；48小时后将培养基收集，用多步离心法进行病毒颗粒的纯化和浓缩，最后将病毒溶解在灭菌的PBS中，分装并储存于-80℃备用，从而得到病毒AAVMTF2，该病毒AAVMTF2具有SEQ ID NO.2所示的基因序列。

2.一种上述表达铁纳米颗粒以及温度敏感通道的病毒AAVMTF在激活神经元方面的用途。