[发明专利]一种检测伏马毒素B1的试纸卡及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测伏马毒素B1的试纸卡及其应用，具体涉及一种用于检测伏马毒素B1的胶体金试纸卡，其特别适用于黄豆、玉米等谷物及饲料样本中伏马毒素B1残留的检测。

背景技术

伏马毒素B1（Fumonisins）是由串珠镰刀菌产生的真菌毒素，目前已知有28种衍生物，分为A、B、C、P四类。其中以FB1最为常见，在自然污染的玉米中，以伏马毒素B1量最多，约占伏马毒素总量的70%。伏马毒素B1与马脑白质软化症、猪的肺水肿症侯群以及人类食道癌等人畜疾病有关。另外，伏马毒素B1还是一种慢性促癌剂，能引起灵长类动物的动脉粥样硬化样改变。

国内外已建立了多种伏马毒素的检测方法，已经应用的有高效液相色谱法（HPLC）、毛细管气相色谱法（GC）、毛细管电泳技术（CE）、液质联用（LC/MS）、气质联用（GC/MS）及酶联免疫吸附检测（ELISA）等方法。其中高效液相色谱法（HPLC），灵敏度高，在全球范围内的玉米及其制品的调查中，90%以上的实验室用的都是HPLC法，其检测限可以达到0.05~0.1 mg/kg。但是，该法需要对检测样品进行严格的预处理，仪器化程度高且价格昂贵，分析速度慢，同时要求有专业的操作人员，不利于在基层推广使用及大量样本筛选。免疫学技术具有敏感、特异、简便的特点，近年来已被应用于伏马毒素B1残留检测。胶体金免疫层析法检测时间短，稳定性好、操作简便、无需其他仪器设备，结果判断直观可靠，适用于进行现场快速筛选。

发明内容

本发明的目的是提供一种灵敏度高、操作简单、成本低、检测时间短的伏马毒素B1残留检测试纸卡。

本发明所提供的检测伏马毒素B1的试纸卡，包括样本吸收垫（1）、结合物释放垫（2）、反应膜（3）、吸水垫（4）和底板（7）；所述反应膜上具有包被有伏马毒素B1半抗原-载体蛋白偶联物的检测线（5）和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线（6），所述结合物释放垫（2）喷涂有伏马毒素B1单克隆抗体-胶体金标记物。

所述伏马毒素B1半抗原-载体蛋白偶联物是由伏马毒素B1半抗原与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白可为牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白、人血清白蛋白、甲状腺蛋白。

所述伏马毒素B1单克隆抗体是以伏马毒素B1半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原免疫动物获得；所述羊抗鼠抗抗体是将鼠源抗体免疫羊得到的。

所述样本吸收垫（1）、结合物释放垫（2）、反应膜（3）、吸水垫（4）依次粘贴在底板（7）上，所述结合物释放垫1/2~2/3被覆盖于样本吸收垫下。

所述底板为PVC底板或其他硬质不吸水的材料；所述样本吸收垫为玻璃棉或聚酯材料；所述吸水垫为吸水纸；所述反应膜为硝酸纤维素膜。

本发明的另一个目的是提供一种制备上述试纸卡的方法，其包括步骤：

1）制备喷涂有伏马毒素B1单克隆抗体-胶体金标记物的结合物释放垫；

2）制备具有包被有伏马毒素B1半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线的反应膜；

3）将1）和2）制备好的结合物释放垫、反应膜与样本吸收垫、吸水垫和底板组装成试纸卡。

具体地说，步骤包括：

1）半抗原制备：将伏马毒素B1与对苯二甲醛反应得到伏马毒素B1半抗原；

2）将伏马毒素B1半抗原与载体蛋白偶联，得到伏马毒素B1半抗原-载体蛋白偶联物；

3）用伏马毒素B1半抗原-载体蛋白偶联物免疫小鼠，将小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞通过融合、筛选，得到伏马毒素B1单克隆抗体杂交瘤细胞株；

4）提取小鼠IgG免疫健康山羊，得到羊抗鼠抗抗体；

5）用柠檬酸三钠与氯金酸反应制备胶体金；

6）将步骤3）制备的伏马毒素B1单克隆抗体加入步骤5）制备的胶体金中，得到伏马毒素B1单克隆抗体-胶体金标记物；

7）将伏马毒素B1单克隆抗体-胶体金标记物喷涂在结合物释放垫上，37℃烘60min后取出，置于干燥环境中保存备用；

8）将伏马毒素B1半抗原-载体蛋白偶联物包被在反应膜上构成检测线，并将羊抗鼠抗抗体包被在反应膜上构成质控线；

9）将样本吸收垫用含0.5%牛血清白蛋白（体积百分含量）、pH为7.2、0.1mol/L磷酸盐缓冲液浸泡2h，37℃下烘干2h；

10）在底板上按顺序粘贴上样本吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫，样本吸收垫盖住结合物释放垫，最后切成3mm宽的小条，加塑料盒，真空包装，4~30℃条件下可保存12个月。