[发明专利]一种C3H10T1/2 中胚层多潜能胚胎干细胞株的诱导分化方法

权利要求书

1.一种C3H10T1/2中胚层多潜能胚胎干细胞株的诱导分化方法，其步骤包括：

（1）、培养与传代：将C3H10T1/2细胞培养于培养液中，并置于5％CO₂的培养箱中培养，待细胞达80％-90％融合后加入0.25%胰酶5mL消化，细胞收缩呈圆形时加入培养液终止胰酶消化反应，离心3-5分钟、沉淀、弃去上清，再加入培养液后吹打；按1：4比例传代培养到6孔板或12孔板，置于5％CO₂的培养箱中培养，每2-4天更换培养液1次；

（2）、诱导分化：待步骤（1）中的培养板上的细胞长满后置于诱导液A中，2天后撤去诱导液A换成诱导液B，2天后撤去诱导液B换成培养液，每2-4天更换培养液1次，待90%以上细胞呈圆形并出现大量脂滴，即表示C3H10T1/2细胞已诱导成功。

2.根据权利要求1所述的C3H10T1/2中胚层多潜能胚胎干细胞株的诱导分化方法，其特征在于：所述步骤（1）或步骤（2）中的培养液为含有体积百分比为10%FBS的DMEM培养液。

3.根据权利要求1所述的C3H10T1/2中胚层多潜能胚胎干细胞株的诱导分化方法，其特征在于：所述步骤（1）中，5％CO₂的培养箱的培养温度为35℃-40℃。

4.根据权利要求1所述的C3H10T1/2中胚层多潜能胚胎干细胞株的诱导分化方法，其特征在于：所述步骤（2）中，诱导液A为含有体积百分比为10%FBS的DMEM培养液，该培养液中还含有胰岛素4-5μg/mL，3-异丁基-1-甲基黄嘌呤0.5-0.7mmol/L，地塞米松1-2μmol/L，吲哚美辛120-130nmol/L,三碘甲状腺氨酸1-2nmol/L，罗格列酮1-2μmol/L。

5.根据权利要求4所述的C3H10T1/2中胚层多潜能胚胎干细胞株的诱导分化方法，其特征在于：所述诱导液A为含有体积百分比为10%FBS的DMEM培养液，该培养液中还含有胰岛素5μg/mL，3-异丁基-1-甲基黄嘌呤0.5mmol/L，地塞米松1μmol/L，吲哚美辛125nmol/L,三碘甲状腺氨酸1nmol/L，罗格列酮1μmol/L。

6.根据权利要求1所述的C3H10T1/2中胚层多潜能胚胎干细胞株的诱导分化方法，其特征在于：所述步骤（2）中，诱导液B为含有体积百分比为10%FBS的DMEM培养液，该培养液中还含胰岛素5-10μg/ml，三碘甲状腺氨酸1-3nmol/L，罗格列酮1-3μmol/L。

7.根据权利要求6所述的C3H10T1/2中胚层多潜能胚胎干细胞株的诱导分化方法，其特征在于：所述诱导液B为含有体积百分比为10%FBS的DMEM培养液，该培养液中还含胰岛素5μg/ml，三碘甲状腺氨酸1nmol/L，罗格列酮1μmol/L。

8.根据权利要求1所述的C3H10T1/2中胚层多潜能胚胎干细胞株的诱导分化方法，其特征在于：将步骤（2）中诱导好的脂肪细胞用含有体积百分比为0.2%BSA的DMEM培养液孵育10-14小时。