[发明专利]基于探针标记免疫金-磁性复合材料检测甲胎蛋白的SERS方法

权利要求书

1.一种基于探针标记免疫金-Fe₃O₄磁性复合材料检测血清中甲胎蛋白含量的表面增强拉曼光谱SERS方法，其特征在于：

(a)制备P-巯基苯甲酸MBA分子标记的金纳米粒子溶液，并与甲胎蛋白抗体结合，同时用BSA试剂进行封闭；

(b)制备SiO₂包覆的Fe₃O₄磁性复合材料；

(c)制备醛基化的SiO₂包覆的Fe₃O₄磁性复合材料，然后配制成PBS分散液；

(d)将一系列已知浓度的甲胎蛋白抗原的PBS溶液分别和步骤(c)的溶液等体积混合，同时用等体积的BSA试剂进行封闭；

(e)将步骤(a)溶液和步骤(d)溶液按体积比1:1混合，在37℃下温育1～2小时进行免疫反应；此时，结合在金纳米粒子上的甲胎蛋白抗体和吸附到醛基化SiO₂包覆的Fe₃O₄磁性复合材料上的甲胎蛋白抗原发生免疫反应；

(f)将上步骤免疫反应后的溶液进行拉曼光谱检测，得到一系列已知浓度的甲胎蛋白抗原的拉曼图谱，以甲胎蛋白抗原浓度的对数值为横坐标，以对应的1078cm^-1位置处的拉曼强度值为纵坐标，绘制定量分析标准工作曲线；

(g)将待测甲胎蛋白浓度的血清和步骤(c)溶液等体积混合，在37℃下温育1～2小时；然后将步骤(a)溶液和本步骤溶液等体积混合，在37℃下温育1～2小时，二者发生免疫反应；将免疫反应后溶液进行拉曼光谱检测，得到拉曼光谱图，读出此光谱在1078cm^-1位置处的拉曼强度值，将此拉曼强度值带入定量分析标准工作曲线，即可得到血清中甲胎蛋白的浓度。

2.如权利要求1所述的基于探针标记免疫金-Fe₃O₄磁性复合材料检测血清中甲胎蛋白含量的表面增强拉曼光谱SERS方法，其特征在于：步骤(a)中MBA分子标记的金纳米粒子的制备是取15～20mL金纳米粒子加入到100μL、10^-3mol/L的MBA的乙醇溶液，搅拌反应10～12h；然后离心、清洗2～4次，用PBS缓冲溶液重悬浮。

3.如权利要求1所述的基于探针标记免疫金-Fe₃O₄磁性复合材料检测血清中甲胎蛋白含量的表面增强拉曼光谱SERS方法，其特征在于：步骤(a)是取MBA分子标记的金纳米粒子溶液15～20mL，向此溶液中加入200～300uL、100ug/mL的甲胎蛋白抗体，充分混合后37℃下反应1～2h，然后离心、重悬浮后除去未反应的甲胎蛋白抗体，从而使得P-巯基苯甲酸MBA分子标记的金纳米粒子与甲胎蛋白抗体结合。

4.如权利要求3所述的基于探针标记免疫金-Fe₃O₄磁性复合材料检测血清中甲胎蛋白含量的表面增强拉曼光谱SERS方法，其特征在于：甲胎蛋白抗体为鼠抗人甲胎蛋白抗体或兔抗人甲胎蛋白抗体。

5.如权利要求1所述的基于探针标记免疫金-Fe₃O₄磁性复合材料检测血清中甲胎蛋白含量的表面增强拉曼光谱SERS方法，其特征在于：步骤(a)用BSA试剂进行封闭是将BSA的PBS溶液加入到溶液中，37℃下反应1～2h，使金纳米粒子表面空位被BSA占据。

6.如权利要求1所述的基于探针标记免疫金-Fe₃O₄磁性复合材料检测血清中甲胎蛋白含量的表面增强拉曼光谱SERS方法，其特征在于：步骤(c)是将SiO₂包覆的Fe₃O₄磁性复合材料分散到30mL、1wt%的3-氨丙基三甲氧基硅烷的乙醇溶液中，电动搅拌20～24小时后分离洗涤，再将其分散到30mL、2.5wt%的戊二醛的水溶液中，搅拌过夜，得到醛基化的SiO₂包覆的Fe₃O₄磁性复合材料，然后分散到30mL PBS缓冲溶液中，最终浓度为4×10^-3mol/L。