[发明专利]胰蛋白酶原-2检测试剂盒及制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及胰蛋白酶原-2含量检测试剂盒，尤其涉及一种人体内胰蛋白酶原-2含量的检测试剂盒及其制备方法，本发明进一步涉及该检测试剂盒在检测人体内胰蛋白酶原-2含量的使用方法，属于人体内胰蛋白酶原-2含量的检测领域。

背景技术

急性胰腺炎（acute pancreatitis，AP）是临床常见的急腹症之一，据国外统计，其发病率在6.5～80/10万人，约占急腹症的10%。有学者认为，其发病机制与基因改变导致胰蛋白酶的过度活化有关。本症起病急，病情险恶，约20%～30%的AP病例可转化为坏死性胰腺炎，导致败血症等严重并发症，因此，早期确诊和治疗十分重要。血淀粉酶（AMS）是诊断AP的常用检测项目，但是其敏感性和特异性都不是十分理想。

胰蛋白酶原(trypsinogen,TPS)是胰蛋白酶的前体,有2种同工酶:胰蛋白酶原-1(TPS-1)和胰蛋白酶原-2(TPS-2)。其中TPS-2是丝氨酸蛋白酶，具有激活基质金属酶功能，能引起组织胶原蛋白的溶解。TPS-2相对分子质量较小，能透过肾小球毛细血管壁，并在肾小管吸收较少。因此,血液和尿液中的TPS-2浓度相差不大。国内外关于TPS-2诊断胰腺炎的价值评价几乎都认为在灵敏度和特异性方面优于淀粉酶(amylase,AMY)和血清脂肪酶。

免疫层析法检测尿胰蛋白酶原-2，诊断急性胰腺炎的敏感性和特异性分别为96.3%和93.3%。证明免疫层析法尿胰蛋白酶原-2的检测可作为诊断急性胰腺炎较好的指标。

北京军区总医院研究报道，采用ELISA法定量检测，以44.05μg/L为临界值，血清胰蛋白酶原-2鉴别胰腺癌与胰腺炎的敏感度和特异度分别为63.3%和73.9%；以1.85μg/L为临界值，鉴别诊断胰腺癌与健康人的敏感度为91.4%，特异度为95.7%。

虽然胰蛋白酶原-2是辅助诊断胰腺炎的特异性和敏感性指标，但是该指标目前常用的检测方法为酶联免疫法和免疫层析法。酶联免疫法检测样本的准确度较高，灵敏度好，但是检测过程繁琐，耗时较长，且样本需要批量检测，不适用于及时检验；同时酶联免疫法检测自动化程度低，检测结果受人为因素影响较大。免疫层析法是近几年来国外兴起的一种快速诊断技术，这种方法检测样本迅速，但一般不能定量检测只能用作定性判断。胶乳增强透射免疫比浊检测（PETIA）技术是在胶乳凝集定性试验基础上发展建立的一种非放射性均相免疫测定法，可以对各种微量的抗原物质和小分子半抗原进行精确的定量测定，同时该检测方法耗时短，自动化程度高，目前越来越多的应用到临床实验室中。鉴于胰蛋白酶原-2具有明确的诊断意义，开发一种对于胰蛋白酶原-2能够快速检测和准确定量的检测试剂盒，对于临床上急性胰腺炎的快速准确诊断具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种准确度好、灵敏度高、稳定性好、线性范围广的胰蛋白酶原-2含量检测的胶乳增强透射免疫比浊法检测试剂盒。

本发明的目的之二是提供一种所述胰蛋白酶原-2含量检测试剂盒的制备方法。

本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的：

一种胰蛋白酶原-2胶乳增强透射免疫比浊法检测试剂盒，由彼此独立的试剂Ⅰ和试剂Ⅱ组成，所述试剂Ⅰ的组分包括：生物缓冲剂、防腐剂、无机盐和水；所述试剂Ⅱ的组分包括：包被胰蛋白酶原-2抗体的胶乳颗粒、生物缓冲剂、防腐剂和水。

本发明通过大量的实验发现，试剂Ⅱ中胶乳颗粒的粒径对试剂盒的检测灵敏度、线性范围、检测结果的准确性及试剂盒的开瓶稳定性等方面有着极显著的影响；本发明通过大量的实验发现，当胶乳颗粒的粒径为100-300nm时，检测灵敏度、线性范围、准确性以及开瓶稳定性等特性要优于其它粒径胶乳颗粒制备的试剂盒。当胶乳颗粒的粒径为150-250nm时其性能要优于粒径为100-150nm及250-300nm的胶乳颗粒制备出的检测试剂盒，尤其是当胶乳颗粒的粒径为180-220nm时具有较好的检测效果；本发明非常意外发现，当胶乳颗粒的粒径为200nm时所制备出来的检测试剂盒在检测灵敏度、线性范围、准确性以及开瓶稳定性等方面明显优于其它粒径的胶乳颗粒的检测效果。