[发明专利]一种弯曲芽孢杆菌及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体来说涉及一种弯曲芽孢杆菌，同时还涉及该弯曲芽孢杆菌在产吡嗪类物质中的用途。

 

背景技术

白酒酿造过程是多种微生物共同参与的过程。酱香型白酒是中国主要香型白酒，其独特的酿造工艺形成了大曲和酒醅中特殊的微生物区系。研究发现，吡嗪类物质，作为酱香型型白酒的主要香味成分之一，其含量高低直接决定了酱香型白酒的优质品率。

酱香风味的形成与细菌关系密切，近些年来，从各地优质白酒酒曲、酒醅中分离出白酒生产功能微生物，并探讨其应用。

目前用于产吡嗪类物质的菌株主要为枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、淀粉芽孢杆菌等，而弯曲芽孢杆菌产吡嗪类物质还没有相关的报道。

发明内容

本发明的目的在于克服上述问题而提供的一种能促进吡嗪类物质增多，自然环境条件的适应范围广，对不良环境的耐受力强，容易培养和保存及工业化生产，生产成本低，不污染环境，不破坏生态平衡的弯曲芽孢杆菌。

本发明的另一目的在于提供该弯曲芽孢杆菌在产吡嗪类物质中的用途。

一种弯曲芽孢杆菌，其形态特征：该菌株在牛肉膏蛋白胨平板上，35℃，2d，菌落直径3～5mm，菌落圆形微凸，颜色乳白色，质地呈蜡状，透明度低，菌落边缘呈波纹状。

该菌种已于2013年5月1日保藏在中国典型培养物保藏中心（地址：中国 武汉 武汉大学），保藏号：CCTCC NO: M2013165，名称为：弯曲芽孢杆菌BF11411（Bacillus flexus BF11411）。

（一）弯曲芽孢杆菌BF11411（Bacillus flexus BF11411）的分离步骤：

从贵州某酒厂酒曲中, 称取20g大曲及糟醅样品放入盛180ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中,振荡约30min。取1ml样品悬液进行10倍梯度稀释分别由10-4、10-5、10-6和10-7稀释度的样品悬液中各取0.2ml涂布于分离培养基上,35℃静止培养2d, 挑取单菌落进一步筛选,斜面培养基上保藏. 

（二）培养芽孢杆菌采用的琼脂培养基：

保藏培养基：牛肉膏蛋白胨培养基，牛肉膏3.0g/L,蛋白胨10.0g/L,NaCl 5g/L,琼脂15～20g/L,PH 7.0～7.2。

固体发酵培养基：高粱麦粒培养基

高粱：小麦为1:1，小麦高粱的粉碎颗粒与整粒比为1:1搅拌均匀，润湿1d，蒸煮30min，装瓶，灭菌。

鉴定培养基：牛肉膏蛋白胨培养基

（三）菌种的保种和传代：

牛肉膏蛋白胨培养基，牛肉膏3.0g/L,蛋白胨10.0g/L,NaCl 5g/L,琼脂15～20g/L,PH 7.0～7.2。

保存方法有3种： 

（1）传代培养细菌菌种保存法：将细菌接种于琼脂斜面培养基上，置温箱18-24h培养后，将棉塞换成橡胶塞用灭菌固体石蜡熔封，移至4℃冰箱保存，一般细菌在4℃冰箱内可以保存一个月     （2）砂土管细菌菌种保存法：取清洁的海沙，用1mol/L的氢氧化钠溶液清洗，然后再用1mol/L的盐酸溶液清洗，在后用流水冲洗。分装试管，约2-3厘米深，干热灭菌，加入细菌培养液1mL左右与砂土混匀，置真空干燥管内干燥，待完全干燥后熔封保存。

（3）冷冻干燥细菌菌种保存法：将待保存的微生物细胞或者孢子悬浮在合适的保护剂中，预先将细胞冷冻，使水冻结，然后在真空条件下，使冰升华以除去大部分水，残留的一些不冻结的水分，再通过蒸发从细胞中除去。

 （四）菌种的生态特征：

该菌形成的菌落在牛肉馆蛋白胨平板上，35℃，培养2d，菌落直径3～5 mm，菌落圆形微凸，颜色乳白色，质地呈蜡状，透明度低，菌落边缘呈波纹状；细胞为圆柱状，细胞宽0.7～1.2μm，长5.0～5.5μm，鞭毛周生，芽孢在包囊位置为中生或偏端，无伴孢晶体。

（五）菌种的培养特性

（1）培养温度25℃～45℃，最适温度30℃～35℃；

（2）.培养pH 5～10；最佳范围为7～7.5。

细胞为圆柱状，细胞宽0.7～1.2μm，长5.0～5.5μm，鞭毛周生，芽孢在包囊位置为中生或偏端，无伴孢晶体。根据根据伯杰细菌鉴定手册描述，鉴定该菌株属于芽孢杆菌属 (Bacillus)，将这一菌株记为弯曲芽孢杆菌BF11411（Bacillus flexus BF11411）。