[发明专利]一种抑制肿瘤细胞活性的新化合物及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种具有抑制肿瘤细胞A549的活性的新化合物，该化合物的制备方法，以及该化合物在制备抑制肿瘤细胞A549活性的药物中的应用。具体而言，本发明涉及式（Ⅰ）的化合物： 

（Ⅰ）。

背景技术

式（Ⅰ）的化合物是通过腊梅拟茎点霉（Phomopsis chimonanthi）的发酵制备获得，该化合物是自然界中首次发现的新天然产物，具有抗肿瘤生物活性，是一个具有很大潜在价值的药物先导化合物。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种新天然化合物的制备。通过研究我们发现了腊梅拟茎点霉（Phomopsis chimonanthi）的固体发酵能够生产得到一种新天然产物3S, 22R, 26-三羟基-8, 24E- 11-羰基-大戟二烯醇。经过活性测试，该化合物具有抑制人肿瘤细胞A549的活性。这也是我们首次在自然界中发现了该化合物。 

本发明专利在微生物次生代谢产物活性化合物的高通量筛选基础上，发现了腊梅拟茎点霉（Phomopsis chimonanthi）的大米发酵粗提物具有抑制肿瘤细胞活性，通过活性跟踪，进一步分离纯化，得到了新化合物3S, 22R, 26-三羟基-8, 24E- 11-羰基-大戟二烯醇。 

本发明的生产菌株为腊梅拟茎点霉（Phomopsis chimonanthi），该菌株已于2011年12月5日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所内，保藏号CGMCC No. 5551。 

式（Ⅰ）的化合物，其特征是结构式为： 

分子式C₃₀H₄₈O₄ ；HRESIMS ：[m/z 495.3462 (M+Na)⁺; Δ –1.2 mmu]；物理性状：无色粉末；它通过腊梅拟茎点霉（Phomopsis chimonanthi）的固体发酵获得。

式（Ⅰ）的化合物的制备方法：其特征是包括如下步骤：生产菌株为腊梅拟茎点霉（Phomopsis chimonanthi）， 

（1）腊梅拟茎点霉（Phomopsis chimonanthi）的活化：

PDA培养基：马铃薯200 g，葡萄糖20 g，琼脂15 g，水1000 mL，制成试管斜面，挑取菌丝体接种于试管斜面上，25 ^oC培养7天；得到孢子浓度为1 × 10⁶ 个/mL的菌悬液；

（2）腊梅拟茎点霉（Phomopsis chimonanthi）的固体发酵培养：

大米培养基，制备过程为：将100 g大米和100 mL 水加入500 mL三角瓶中，浸泡过夜，灭菌冷却待用；取制备好的菌悬液5 mL接种于大米培养基上，25 ^oC培养40天；

（3）待发酵完毕，将乙酸乙酯加入三角瓶中提取三次，减压蒸干有机溶剂，得到粗提物；

（4）将粗提物用石油醚-乙酸乙酯-甲醇体系进行减压硅胶柱层析；

（5）将减压硅胶柱层析所得组分：石油醚: 乙酸乙酯= 2:8，通过Sephdex-LH 20分离，洗脱剂为1:1 CHCl₃-CH₃OH，反复分离后直接得到目标化合物。

具体实施方式

实施例1

式（Ⅰ）的化合物的分离制备

a. 腊梅拟茎点霉（Phomopsis chimonanthi）的活化：

PDA培养基：马铃薯200 g，葡萄糖20 g，琼脂15 g，水1000 mL，制成试管斜面，挑取菌丝体接种于试管斜面上，25 ^oC培养7天；得到孢子浓度为1 × 10⁶ 个/mL的菌悬液；

b. 腊梅拟茎点霉（Phomopsis chimonanthi）的固体发酵培养：