[发明专利]一种分离富集水中青霉素类抗生素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种水环境中痕量青霉素类抗生素的检测前处理方法，具体地说是一种同时分离富集地表水和城市污水中两种痕量的青霉素类抗生素-舒巴坦和氯唑西林的方法。 

背景技术

青霉素类抗生素是指分子中含有青霉烷，能破坏细菌的细胞壁并在细菌细胞的繁殖期起杀菌作用的一类抗生素。对细菌的选择作用强，而对人几乎没有毒性，所以是一类高效、低毒、在临床广泛应用的重要抗生素。 

青霉素类抗生素由于其具有杀菌作用强、疗效优、毒性低、价格低等优势，在我国抗生素类药物用量上名列前茅。青霉素的滥用产生了严重的副作用-耐药菌的产生。耐药菌的产生，使难治性感染越来越多。如过去对青霉素非常敏感的肺炎链球菌，已经对青霉素、红霉素、氯霉素类抗生素都产生免疫作用。 

地表水和城市污水中的抗生素类药物残留主要来自于医院、养殖场和制药企业等废水的排放。研究结果表明，环境水样中的青霉素类抗生素含量甚微，仅为ng/L或μg/L级，且部分青霉素类抗生素在水环境中不稳定，容易发生水解作用。因此，检测水环境中痕量青霉素类抗生素要求水样的预处理方法在保证抗生素不分解的条件下，具有较高的富集倍数和较好的重复性；同时，预处理方法应该满足操作简单，耗时较少，使用药品环境友好，使用量少等要求。环境水样中提取抗生素的方法较多，包括液液萃取、冻干法、固相萃取、固相微萃取和分子印迹技术等。其中固相萃取技术由于其操作简便，处理样品量大，富集效率高，外来污染少，可重复性强，且可应用于自动装置而成为富集抗生素等微污染物首选方式。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种分离富集水中青霉素类抗生素的方法，该方法采用高效液相色谱-串联质谱法实现对水环境样品中痕量青霉素类抗生素进行测定，检测一个样品仅需5min左右，青霉素类抗生素的定量下限能够达到10μg/L，实际样品浓度的定量下限能够低至4ng/L，回收率在69.9％～86.9％之间，相对标准偏差低于5％，满足环境样品检测的要求。 

为实现上述目的，本发明提供的分离富集水中青霉素类抗生素的方法，包括如下步骤： 

(1)水样的预处理 

用酸将水样pH调至2-4，过滤，得到预处理后的水样； 

(2)分离富集 

依次用丙酮、甲醇，含乙酸铵的甲酸水溶液活化HLB固相萃取柱，加超纯水保持HLB固相萃取柱中树脂处于活化状态，水样过柱； 

富集完成后，将HLB固相萃取柱在氮气保护下干燥，用洗脱液洗脱，收集洗脱液并在氮气流下吹干，加入乙腈溶解残留物待测； 

(3)定量检测青霉素类抗生素(舒巴坦和氯唑西林)的浓度； 

所述的检测方法，其中，步骤1中水样过滤是用0.47μm的GF/F滤膜。 

所述的检测方法，其中，步骤1中是加入盐酸或硫酸调节水样pH。 

所述的检测方法，其中，步骤2中甲酸水溶液含有体积比0.1％的乙酸铵。 

所述的检测方法，其中，步骤2中的水样过柱控制流速为3.0-5.0mL/min。 

所述的检测方法，其中，步骤2中洗脱HLB固相萃取柱的洗脱液流速小于1.0mL/min。 

所述的检测方法，其中，步骤2中的洗脱液为含有体积比1％甲酸的甲醇溶液。 

所述的检测方法，其中，步骤3是采用液相色谱-串联质谱法检测舒巴坦和氯唑西林的浓度。 

本发明的有益效果是： 

1)该方法处理水样过程所用的试剂低毒，使用量少，环境友好。 

2)该方法对水样的富集倍数高达2500倍，同时富集效率较高，回收率在69.9％～86.9％之间。 

3)该方法操作较为简单，可重复性强，同一批样品的相对标准偏差低于5％，满足预处理方法要求。 

4)该方法能够同时富集同一类抗生素的多种药物及其它物理化学性质与青霉素类抗生素相似的药物，适用范围较广，使用现代分析仪器检测用时较少，检测限低，线性范围宽，准确度较高，样品检测效率高。 

附图说明

图1为本发明100μg/L的两种青霉素类抗生素混合标准品溶液的离子流图，出峰顺序为舒巴坦：1.85min；氯唑西林：4.81min。 

图2为舒巴坦定量子离子标准曲线。 

图3为氯唑西林定量子离子标准曲线。 

具体实施方式

本发明提供水环境中两种痕量青霉素类抗生素的检测方法，具体包括如下步骤： 

(1)水样的预处理