[发明专利]对磷酸二氢铵耐受的侧孢芽孢杆菌的筛选方法

权利要求书

1.对磷酸二氢铵耐受的侧孢芽孢杆菌的筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）分离基础培养基的制备；

（2）灭菌；

（3）复壮；

（4）筛选；

（5）驯化。

2.根据权利要求1所述的对磷酸二氢铵耐受的侧孢芽孢杆菌的筛选方法，其特征在于，在步骤（1）中，基础培养基采用营养琼脂培养基。

3.根据权利要求2所述的对磷酸二氢铵耐受的侧孢芽孢杆菌的筛选方法，其特征在于，在步骤（1）中，营养琼脂培养基的组成如下：7-13克蛋白胨，0.5-5.5克牛肉粉，0.1-0.9克ZnSO₄，0.1-0.9克Na₂B₄O₇.10H₂O，0.2-1.8克黄腐酸钾，1-9克磷酸二氢铵及700-1300mL水；制备好的营养琼脂培养基的pH为7.3±0.1。

4.根据权利要求3所述的对磷酸二氢铵耐受的侧孢芽孢杆菌的筛选方法，其特征在于，在步骤（2）中，营养琼脂培养基经过高温灭菌，灭好菌的营养琼脂培养基倒平板准备培养皿，试管培养基摆斜面制备营养琼脂试管斜面，冷却，备用。

5.根据权利要求4所述的对磷酸二氢铵耐受的侧孢芽孢杆菌的筛选方法，其特征在于，在步骤（3）中，超净工作台开紫外灯灭菌，实验室甲醛熏蒸，吸无菌水加入冻干管中，将侧孢芽孢杆菌菌种干粉做成菌悬液，在火焰封口的状态下倒入步骤（2）中制备好的营养琼脂试管斜面上，将菌悬液平铺在斜面培养基上，放入恒温培养箱中34℃±0.5℃，培养3—5天。

6.根据权利要求5所述的对磷酸二氢铵耐受的侧孢芽孢杆菌的筛选方法，其特征在于，在步骤（4）中，在菌种操作间，将超净工作台开紫外灯灭菌，进行无菌操作，用接种针在步骤（3）中培养好的试管斜面菌种挑起菌落，在步骤（2）中准备好的培养皿中划线，将划好线的培养皿放入恒温培养箱中34℃±0.5℃，培养3—5天，观察是否有典型的侧孢芽孢杆菌的单菌落形成；将典型的侧孢芽孢杆菌的单菌落，转入步骤（2）中准备好的营养琼脂试管斜面上，放入恒温培养箱中34℃±0.5℃，培养3—5天，待用。

7.根据权利要求6所述的对磷酸二氢铵耐受的侧孢芽孢杆菌的筛选方法，其特征在于，在步骤（5）中，按照磷酸二氢铵质量分数为0.5-3.5%、3.6-6.5%、6.6-9.4%、9.5-12.5%、12.6-15.5%、15.6-18.5%、18.6-21.5%和21.6-24%在营养琼脂培养基里相应增加磷酸二氢铵的浓度，分别制备成培养皿；在步骤（4）中培养好的营养琼脂试管斜面上，挑菌种首先在磷酸二氢铵质量分数为0.5-3.5%的培养皿划线培养，将培养的单菌落转入步骤（2）中准备好的营养琼脂试管斜面上培养，培养结束后作为菌种在下一个磷酸二氢铵浓度的培养皿中划线培养，依次类推。

8.根据权利要求1-7任一所述的对磷酸二氢铵耐受的侧孢芽孢杆菌的筛选方法，其特征在于，在步骤（4）和步骤（5）中，开紫外灯灭菌至少30分钟。

9.根据权利要求7所述的对磷酸二氢铵耐受的侧孢芽孢杆菌的筛选方法，其特征在于，在步骤（5）中，按照磷酸二氢铵质量分数为3%、6%、9%、12%、15%、18%、21%和24%在营养琼脂培养基里相应增加磷酸二氢铵的浓度，分别制备成培养皿。