[发明专利]大肠杆菌混合溶组织内阿米巴在制备治疗肝癌实体瘤药物中的应用

权利要求书

1.大肠杆菌混合溶组织内阿米巴在制备治疗肝癌实体瘤药物中的应用，其特征是：它是将终浓度为1×10⁶个/ml大肠杆菌与终浓度为1.0×10⁵/ml阿米巴滋养体混合，制成大肠杆菌+阿米巴滋养体细胞悬液制剂药物，定向注射接种到肝癌实体瘤中，用于治疗肝癌实体瘤。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征是：所述的大肠杆菌+阿米巴滋养体细胞悬液制剂采用下述方法制得：

（1）大肠杆菌培养：按常规方法培养大肠杆菌；

（2）溶组织内阿米巴培养：采用Robinson’s培养基按有菌培养方法培养，每隔2-3天转种一次；取培养72小时生长至对数生长期的阿米巴培养管，冰浴5min，混匀，收集培养物；用200目筛网过滤，收集滤液，1500rpm离心5min，弃上清；取沉淀物上层，用NS清洗，1500rpm离心5min，洗涤两次；取沉淀物用NS重悬，计数板计数，调整虫数为1×10⁵/ml，用0.1%台盼蓝染色显微镜下计数鉴定其活度，保证阿米巴活虫数达95%以上用于实验；

（3）将阿米巴悬液1ml加入1×10⁶个/ml的大肠杆菌液1ml，1500rpm离心5min，去掉1ml上清液，混匀，即制得混合液里阿米巴终浓度为1.0×10⁵/ml，大肠杆菌终浓度为1×10⁶个/ml的大肠杆菌溶组织阿米巴滋养体悬液。