[发明专利]一种以链霉菌提制阿里沙霉素的方法

权利要求书

1.一种以链霉菌提制阿里沙霉素的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

A、以三泽链霉菌(Streptomyces misawanensis)D35作为发酵菌株，制备发酵液；

B、真空抽滤除去发酵液中的菌丝体，再采用乙酸乙酯进行萃取，得粗提液，将该粗提液在70℃真空浓缩制得粗提取物；

C、将上述浓缩的粗提物上硅胶柱进行三次柱层析，第一次柱层析用乙酸乙酯作洗脱剂，第二次柱层析用乙酸乙酯和丙酮的混合洗脱液进行梯度洗脱，第三次柱层析用石油醚和丙酮的混合洗脱液进行梯度洗脱，并经薄层点板合并活性组分；

D、将上述活性组分采用高效液相色谱进行纯化，得单体化合物，色谱条件如下：色谱柱:Prep MS C₁₈Column10um,7.8×300mm，乙腈：水：乙酸的体积比为45：55：0.5作为流动相，柱温为35℃，流速为7mL/min，保留时间为30min，检测波长为279nm，进料量100μL；

E、采用核磁共振氢谱及核磁共振碳谱技术对上述单体化合物进行结构鉴定，该单体化合物为阿里沙霉素。

2.如权利要求1所述的一种以链霉菌提制阿里沙霉素的方法，其特征在于，所述步骤A中的发酵液是挑取在高氏一号斜面培养基上新鲜培养的三泽链霉菌株D35的孢子接种到种子培养液中，28-30℃，转速为180-250r/min预培养24-32h后，按5-10%的接种量转接到发酵培养基中，27-31℃，转速为180-250r/min震荡培养72-84h制得。

3.如权利要求2所述的一种以链霉菌提制阿里沙霉素的方法，其特征在于，所述种子培养液和发酵培养基配方为：可溶性淀粉20g、KNO₃1g、K₂HPO₄1g、NaCl1g、CaCO₃4g及蒸馏水1000mL，pH7.2。

4.如权利要求1所述的一种以链霉菌提制阿里沙霉素的方法，其特征在于，所述步骤B中粗提液是于室温下，将乙酸乙酯与发酵液按2:1的体积比混合，静置分层，收集萃取相得到。

5.如权利要求1所述的一种以链霉菌提制阿里沙霉素的方法，其特征在于，所述步骤C中第二次柱层析进行梯度洗脱时的乙酸乙酯和丙酮的体积比为8：1、6：1和2：1。

6.如权利要求1所述的一种以链霉菌提制阿里沙霉素的方法，其特征在于，所述步骤C中第三次柱层析进行梯度洗脱时的石油醚和丙酮的体积比为4：1、3：1和2：1。