[发明专利]测定动物肉体中甲基汞和乙基汞的方法

说明书

技术领域

本发明涉及测定动物肉体鱼肉中甲基汞和乙基汞的方法。

背景技术

海鲜是人类最基本的甲基汞污染源90％的甲基汞都是被胃肠道吸收，通过与硫醇络合而进入血液被运输到全身。口腔接触，中枢神经系统是最主要的靶器官，特别是在婴儿发展阶段。这些毒害效应使一些感觉功能(视力，听力)、运动协调、记忆力、注意力和学习能力改变。低剂量汞毒性对不同器官体系的效应，包括：神经系统、运动系统、肾脏系统、心血管系统、免疫系统和生殖系统。最极端的例子是在日本水俣和新泻、伊拉克引起死亡。

在河床中，总汞中甲基汞的含量不会超过25％，一般都小于10％。然而，水生系统中的汞很容易被水生生物吸收，引起甲基汞在鱼体内的积累。最终导致，即使在甲基汞低浓度的水中，也会导致鱼肉产生高浓度的汞污染。

鱼肉或者其他类型的海产品大多都是以甲基汞的形式被人体吸收，并且鱼肉中甲基汞的含量占总汞的72-100％。鱼体内的甲基汞转化主要是依赖于营养水平、鱼年龄和鱼长度，在食物链最上的生物甲基汞浓度高于水中生物含量的三个数量级，这可能会在食入大量鱼肉的人群中引起健康问题。在我国珠江三角区，向同一个池塘采用不同的喂食方案，通过测定不同鱼种类体内汞的浓度，发现与其它的鱼相比(杂食类、草食类、虑食类)食肉鱼(黑鲈，大口黑鲈)含有很高的总汞含量(0.9567mg/kg)，说明在水生食物链中有一个很明显的生物积累和生物扩大效应。

关于鱼肉中汞限量标准，我国国家标准GB2762-2012和欧盟No629/2008的标准大致相同，都规定(除肉食性鱼类)甲基汞限量为0.50mg/kg，肉食性鱼类、扇贝及其制品甲基汞限量为1.0mg/kg。2003年FAO/WHO委员会关于食品添加剂建立暂定的每周最大摄入量，MeHg的可摄入量为1.6μg/kg(体重)，总汞5μg/kg(体重)。2010年，每周最大摄入量撤销对总汞的限制，取而代之的是对无机汞的每周最大摄入量限制为4μg/kg(体重)。这种新的每周最大摄入量除了适用于鱼肉和贝类也适用于对其他食品的限量。对于食品，最应该限制的是甲基汞的每周最大摄入量。

最新关于海产品中已存的污染值是基于总汞浓度，甲基汞是基于简单评价，即在鱼肉中甲基汞的平均含量占到总汞含量的84％，其他形态的含量小于或者等于15％。但在文献中反对该假设，认为甲基汞在总汞中的含量不到84％。这种发现更肯定了除测定总汞浓度外，还需检测甲基汞浓度，以便获得更多特异性的毒理性参考价值和建议。

定量和定性分析都包括样品的前处理步骤。提取步骤是很多分析程序必不可少的，索氏提取至今在很多常规实验室都还在使用。近几年，对新的提取技术要求日益增加，该技术需要能自动化，提取时间短，有机溶剂消耗少，可规避污染分析实验室和减少样品前处理量。由于要求驱使，出现了大量新技术，如微波辅助萃取(MAE)，超临界流体萃取(SFE)和加压液体萃取法(PLE；加速溶剂萃取，商业用名为ASE)。它们之间的共性在于，工作时能升温和增压，从而提高提取步骤的速度。

MAE最大的优势就是微波加热可以减少提取时间。这主要是由于微波加热和传统加热方式的不同。在传统的加热方式中，在热量被传到溶剂中时，需要一定的时间来加热消解罐。而对于微波加热，溶剂是被微波直接加热。这样使温度以一个最小的梯度上升。另外，MAE极大的减小有机试剂消耗，可同时消解多种样品。现代药品消解有一些标准，MAE都可以最大限度的满足相关要求。Cecilia Sparr Eskilsson等人做过相关统计，从十年之前的科技统计文献就可看出MAE已成功地替代传统手段的趋势。

联用技术是目前汞形态分析最常用的技术，其中HPLC和AFS以其具有接口简单、价格低、灵敏度高、线性范围宽、检出限低、抗干扰能力强等优点，成为汞形态分析的首选技术，本研究拟用微波辅助萃取、并结合高效液相色谱分离技术、利用原子荧光光度计测定鱼肉中的甲基汞和乙基汞。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种测定动物肉体中甲基汞和乙基汞的方法，采用微波辅助萃取和HPLC-AFS联用的方法，具有简单快速、测定灵敏度高、准确度好、抗干扰能力强的特点。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：测定动物肉体中甲基汞和乙基汞的方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)动物肉体样品预处理：将动物肉体样品绞碎，-75～-85℃预冷冻2.5～3.5小时，放进真空冷冻干燥机，冷冻65～80h，将其碾碎，放至-18～-22℃冰箱，待分析检测；