[发明专利]一种化妆品活性成分经皮吸收效率的检测方法

说明书

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，涉及一种化妆品活性成分经皮吸收效率的检测方法，特别涉及一种促渗剂及组合的高通量筛选方法。

背景技术

在化妆品科学领域，营养、保湿、抗衰老、美白等功效化妆品的开发是满足人们对美的更高层次的诉求；但简单原料的添加不一定能发挥活性成分的作用，还可能滋生细菌引起皮肤的感染等负面效果。因此，功效化妆品的研发还要重视化妆品的经皮吸收现象，合理的评价活性成分对作用部位的靶向性、有效浓度及持续时间。化妆品的经皮吸收指其有效成分通过表皮角质层，达到不同作用皮肤层发挥各种作用的过程；与药物“经皮吸收”的主要区别在于化妆品功能性成分是以经皮渗透后积聚作用在皮肤表面、表皮层或真皮层为最终目的；而药物经皮吸收则是以进入血液循环系统，遍布脏腑器官为最终目的。例如，防晒产品中的美白剂常作用于表皮中的基底层，阻断黑色素；而抗衰老产品的活性成分则常作用于真皮层的成纤维细胞，使皮肤富有弹性。

经皮吸收的主要途径有角质层、毛囊和汗腺；一般认为经皮渗透的主要屏障来自角质层。就化妆品配方设计本身来说，添加化学促渗剂是至今应用最普遍的促渗透方法，不仅可逆地改变皮肤角质层屏障作用，且不损伤任何细胞。通常化学促渗剂或者有利于促进水溶性活性成分吸收，或者有利于促进亲脂性活性成分的吸收，或者有利于促进活性成分透过真皮层进入循环系统，或者有利于促进活性成分透过角质层进入皮层，需要结合活性成分自身性质和靶向位点筛选合适的促渗剂和配方。

但化妆品经皮吸收基础理论及检测行业中还是沿用医药的理论及检测方法，缺少统一的化妆品的经皮吸收检测方法及评价标准。选用与人皮肤相似的猪耳皮肤、仿生皮肤，建立体外渗透模型是药物和化妆品经皮吸收检测都适用的方法。目前实验室最常用的体外法是Franz扩散池法。其具体操作方法如下：将活性物或配方涂布于离体皮肤角质层面，皮肤样本固定于扩散池的上方，皮肤角质层面向上，底面与接收池中液体接触，定时提取接收液，分析测定活性物含量以表征吸收效率。Franz扩散池法的准确性依赖于活性成分经皮传输的稳定状态，虽然能够定量分析经皮吸收率，但不适于大量检测。因为Franz扩散池法所需皮肤的面积较大(直径16mm)，需要分别单次收集和处理样品，操作繁琐、工作量大；再者达到传输稳定状态耗时较长，整个检测的周期需24h以上，严重影响了促渗透配方的开发效率。

鉴于以上经皮吸收检测方法在化妆品配方开发中应用的严重缺陷，根据化妆品活性成分和药物的作用靶点的差异性，本发明设计一种高通量筛选化妆品配方或促渗剂的经皮吸收实验方法。

本发明的基本原理：促进经皮吸收的化学渗透剂引起溶质在皮肤上的渗透效率改变的同时引起皮肤电导率改变，电导率和渗透率的相关性遵循Nernst-Planck和Nernst-Einsten方程，即渗透率与皮肤电导率呈正相关。因此，电导率测定提供了一种检测溶质，优选极性溶质，渗透效率的快速方法。本发明将电导仪的一个电极定位于化妆品活性成分作用靶点真皮层或表皮层，采用合适的高通量装置，将Franz扩散池法改进为适用于化妆品的高通量、高效率的经皮吸收评价方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于体外评估化妆品活性成分经皮吸收率的高通量方法。

本发明的检测方法包括组装高通量扩散池、制备样品及加样、测定样品池电导率、数据统计分析4步。

所述高通量扩散池由2块规格相同（3-5cm）×（3-5cm）大小，厚1-1.2cm的聚四氟乙烯涂层筛孔板，分别作为顶板和底板；顶板和底板上各有24-100个排列均匀且对应的直径为3-10mm的通孔，分别作为供体池和受体池；中间夹层为仿生皮肤或者猪皮组成的三明治结构。实验所用皮肤从–70℃取出室温融化，测定电阻率保证其完整性，然后将其角质层朝上面向顶板放置，两板由4个螺栓扣拧紧固定。

所述活性成分和促渗剂组合物是将活性成分和促渗剂分别按照一定浓度和比例溶于PBS-乙醇溶剂，活性成分体积质量浓度为100-250mg/ml，而促渗剂的总质量百分比浓度为0%-5%；所述活性成分为极性化合物，分子量为1-10kD；所述PBS-乙醇溶剂中PBS︰乙醇=1︰0～2︰3。加样要求如下：按照顶板的供体池孔径大小，每个供体池加60-800μl活性成分-促渗剂组合物样品或配方样品，每个样品做3-5个平行处理，以不加促渗剂的样品或已知渗透速率的化合物作为对照；底板的受体池加满PBS-乙醇溶剂。