[发明专利]抗伏马菌素B1的单克隆重组抗体H2

说明书

技术领域

本发明属于植物免疫学技术领域，具体涉及一种抗伏马菌素B1的单克隆重组抗体H2的制备及其应用，所述的杂交瘤细胞株能够分泌抗伏马菌素B1单克隆抗体，进一步通过基因工程技术制备得到所述的单克隆抗体的重组抗体，该单克隆抗体或制备的重组抗体可应用于伏马菌素的免疫学检测中。

背景技术

伏马菌素(Fumonisins)于1988年首次从串珠镰刀菌(Fusarium verticillioides(Sacc.)Nirenberg)培养液中分离鉴定出来，是一类由不同多氢醇和丙三羧酸组成结构类似的双酯化合物，包括一个由20个碳组成的脂肪链及通过两个酯键连接的亲水性侧链。到目前为止，已分离鉴定出几十种伏马菌素类似物或异构体，分属于A、B、C、D和P组，其中以B组的FB1、FB2和FB3污染最严重，毒性也最强，可引起鼠肝癌、猪肺水肿和马脑白质软化症，并且是人类的潜在致癌物，国际癌症研究机构(IARC)将其归为2B类。报道有超过15种镰刀菌、以及交链格孢(Alternaria alternata(Fr.)Keissler f.sp.lycopersici)和黑曲霉(Aspergillus niger)能够产生各种类型的伏马菌素，但串珠镰刀菌(f. verticillioides)和多育镰刀菌(f. proliferatum)是最主要的产毒菌株。伏马菌素能够污染玉米、高粱、水稻、小麦、大麦、黍、菜豆和香料作物等，其中玉米及玉米来源的食品和饲料中含量最大。目前，伏马菌素的污染在世界范围内部有报道，但以我国和南非的部分地区污染最为严重。在我国，调查显示玉米、水稻和小麦三大粮食作物均不同程度的受到伏马菌素的污染。因此，我国玉米等粮食作物中伏马菌素的污染处于高发生率和高含量的严峻态势，而关于伏马菌素的研究也得到社会的广泛关注，成为近20年来食品安全和真菌毒素研究中的热点。

真菌毒素的检测方法较多，主要分为生物学检测、化学检测和免疫学检测。生物学检测常用的有细胞培养实验、种子发芽实验和皮肤毒性试验等，虽然操作简单，但具有特异性差、误差大等缺点，现在应用较少。化学检测方法具有较高的灵敏度、准确性和特异性，但需要较复杂的样品预处理过程和较贵重的仪器设备，不易在欠发达地区和农村推广使用。免疫学方法具备操作简单、费用低、灵敏度高和特异性好等优势，而且开发的快速检测试剂盒和试纸条等携带方便，可随时检测样品，所以免疫检测方法越来越被广泛用于各种样品的检测分析。因此，通过制备抗伏马菌素FB1的单克隆抗体和重组抗体，大量纯化后检测抗体的结合力和特异性，获得高亲和力的单克隆抗体和重组抗体，可为伏马菌素FB1的抗原性研究和免疫学检测方法的建立提供原材料，在此基础上发展的免疫检测方法在食品安全和进出口检验检疫过程中，为检测和调查玉米等粮食作物、饲料以及食品或制品中伏马菌素的污染情况提供快速可靠的检测手段。所以，筛选能够分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株是大量生产单克隆抗体和制备单克隆重组抗体的基础。此外，相对于多克隆抗体和单克隆抗体，重组抗体及其编码基因可通过噬菌体展示技术筛选获得，继而可以在大肠杆菌表达系统中超量表达后从提取纯化，其制备过程不需要使用动物，操作简单、省时省力。但是，由于杂交瘤细胞中无功能抗体编码基因的大量存在以及基因重组等因素的影响，直接利用PCR技术从杂交瘤细胞中扩增重组抗体的编码基因，会存在缺失、移码和终止突变等现象，组装后的重组抗体不一定保持原有亲本抗体的活性。而噬菌体展示技术不仅是一个高效筛选体系，也是一个体外成熟过程，通过抗体基因库技术和噬菌体展示技术有可能获得亲和力和特异性得到改善的单克隆重组抗体。因此，本发明通过杂交瘤技术筛选分泌抗伏马菌素单克隆抗体的杂交瘤细胞株，并在此基础上通过噬菌体展示技术获得高亲和力的单克隆重组抗体，对探索发展有效的伏马菌素检测方法等具有重要意义。

发明内容

本发明目的在于克服现有技术的不足，提供了能够分泌抗伏马菌素B1单克隆抗体的杂交瘤细胞株，并在此基础上分离得到单克隆重组抗体，本发明得到的单克隆抗体或制备的重组抗体可应用于伏马菌素的免疫学检测中。

本发明通过以下技术方案实现：