[发明专利]一种利用组织培养技术快速繁殖湖北贝母的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种贝母的组织培养方法，具体涉及到湖北贝母的快速繁殖方法。

背景技术

湖北贝母(Fritillaria hupehensis Hsiao et K. C. Hsia) ,又称鄂贝、板贝、窑贝、奉贝,为百合科(Liliaceae) 贝母属( Fritillaria L . ) 多年生草本植物，湖北贝母在湖北建始，宣恩一带有栽培，现在是恩施GAP基地品种，是恩施州大力发展的药材之一，目前广泛存在着环境恶化，土壤养分缺乏的问题，并且湖北贝母的繁殖以鳞茎繁殖为主，也可用鳞片和种子繁殖，进行无性繁殖多代后，应进行1次有性繁殖。但因湖北贝母开花多，结果极少，难收到较多种子，种子繁殖尚在试验阶段，由于湖北贝母具有较高的药用价值，主要食用其鳞茎，目前对贝母鳞茎需求量大，直接用地下鳞茎进行繁殖还发育缓慢,需要4-5 年才能发育到商品鳞茎的大小，生长周期长，因此其栽培面积和产量都受到很大的限制，由于目前对贝母的需求大幅度增加，价格也随之水涨船高，所以快速的增殖湖北贝母具有很重要的意义，对提高人们的收入具有很高的价值。

目前经过20多年的研究，湖北贝母已经成为贝母中仅次于浙贝母的第二大主流贝母商品，利用组织培养及快繁技术可提高繁殖系数，扩大栽培面积。对生产具有很大的帮助。目前对贝母组织培养及快繁技术已经有了很多的研究，但对湖北贝母的研究相对较少，并且没有形成一套完整的繁殖体系。

 

发明内容

本发明主要解决的技术问题是提供一种能够利用组织培养技术快速繁殖湖北贝母的方法。

为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是：

一种利用组织培养技术快速繁殖湖北贝母的方法，包括以下步骤：

（1）外植体的选择与消毒处理：首先选用生长健壮、成熟的新鲜的湖北贝母鳞茎球，剥去鳞茎最外层干皱的鳞片和基部残余老根，先用自来水流水冲洗2-3次，接着用50％利福平300倍液浸泡20-30 min后用滤纸吸干水分，然后将鳞茎球一层一层的剥开，然后将剥开的鳞片转入到高压消毒的烧杯中，在超净工作台上先用75 %酒精浸泡杀菌30 s，去除酒精，用无菌水漂洗3-4 次，再用2%次氯酸钠溶液消毒10min，无菌水冲洗2-3次。迅速加入3 %双氧水浸泡杀菌8-10 min ，浸泡过程中经常摇动烧杯，然后倒掉升双氧水液体，用无菌水冲洗4-5 次后，再用无菌水浸泡备用。

（2）材料的处理：将消毒处理好的鳞片用无菌滤纸吸干，在无菌条件下将鳞片按照上、中、下部还有基部，分别切成3-5mm见方的小块，并且上、中、下部还有基部的材料分别进行下一步培养。

（3）愈伤组织诱导及芽分化：在无菌的条件下将步骤（2）得到的外植体接种在愈伤组织诱导培养基中，该培养基是在在MS常规培养基中添加了0.6mg/L的6-BA、0.8mg/L的GA₃，80mg/L的蔗糖、10 g/L琼脂和0.4 mg /L的ZT；培养温度为26℃，光照时间13h/d，光照强度2 200 Lx，PH为 6.5，经过10-15天形成愈伤组织，也有部分直接分化出小细芽；

（4）芽的增殖：将步骤（3）中直接分化出来的小细芽接种到3/4MS+琼脂6.0g/L+ NAA 0. 5mg/L + GA₃ 0.5mg/L+ ZT 0.2mg/L +蔗糖15g/L的培养基上，培养温度为25℃，光照时间12h/d，光照强度2 000 Lx，PH为 6.5，每瓶接种1个芽，8-12 天后将诱导的丛生小鳞茎，将其中生长健壮、长势良好的小鳞茎转接至生根培养基，其余的小单芽再进行继代培养。

（5）愈伤组织的继代培养：将步骤（3）中形成的愈伤组织接种到1/2MS +6-BA2.0 mg/L + GA₃ 0.5mg/L+ KT 0.5mg/L +蔗糖20g/L +琼脂5 g/L的培养基上，培养温度为25℃，光照时间12h/d，光照强度2 000 Lx，PH为 6.5，经过15-20天长出小鳞茎。

（6）生根培养：将经过步骤（4）和步骤（5）分化出来的小鳞茎一个个分别接种于下列诱导培养基中进行生根诱导：3/4MS培养基+琼脂8g/L +KT1.2mg/L +蔗糖20mg/L+活性炭2.0mg/L，培养温度为24℃，光照周期12h/d，光强度为2200lux，PH值为6.5，经过20-25天待小鳞茎长至2-3cm高，当根系比较健壮并且长出6-10个根时，即开始下一个阶段；