[发明专利]制备利拉鲁肽的方法

说明书

技术领域

本发明属于多肽药物制备方法技术领域，特别涉及制备利拉鲁肽的方法。

背景技术

利拉鲁肽具有以下的结构：

His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-

Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys(N^α-PAL-γ-Glu)-

Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly-OH。

利拉鲁肽是一种GLP-1（胰高血糖素样肽）类似物，与人GLP-1具有97%的序列同源性，人GLP-1可以结合并激活GLP-1受体。GLP-1受体为天然GLP-1的靶点，GLP-1是一种内源性肠促胰岛素激素，能够促进胰腺β细胞葡萄糖浓度依赖性地分泌胰岛素。与大然GLP-1不同的是，利拉鲁肽在人体中的药代动力学和药效动力学特点均适合每天一次的给药方案。皮下注射给药后，其作用时间延长的机理包括:使吸收减慢的自联作用;与白蛋白结合;对二肽基肽酶IV(DPP-IV)和中性内肽酶(NEP)具有更高的酶稳定性，从而具有较长的血浆半衰期。

利拉鲁肽的活性由其与GLP-1受体间特定的相互作用介导，导致环磷酸腺苷(cAMP)的增加。利拉鲁肽能够以葡萄糖浓度依赖的模式刺激胰岛素的分泌，同时以葡萄糖浓度依赖的模式降低过高的胰高糖素的分泌。因此，当血糖升高时，胰岛素分泌受到刺激，同时胰高糖素分泌受到抑制。与之相反，在低血糖时利拉鲁肽能够减少胰岛素分泌，且不影响胰高糖素的分泌。利拉鲁肽的降血糖机理还包括轻微延长胃排空时间。利拉鲁肽能够通过减轻饥饿感和能量摄入降低体重和体脂量。

利拉鲁肽的作用持续时间为24小时，能够通过降低2型糖尿病患者的空腹及餐后血糖而改善血糖控制。在2型糖尿病患者中，单次给予利拉鲁肽可以观察到胰岛素分泌率以葡萄糖浓度依赖的模式增加。

利拉鲁肽经皮下注射后的吸收比较缓慢，在给药后8-12小时达到最大浓度。单次皮下注射利拉鲁肽0.6mg之后，利拉鲁肽的最大浓度估计值为9.4nmol/L。在1.8mg的利拉鲁肽剂量水平下，利拉鲁肽的平均稳态浓度(AUC1/24)达到约34nmol/L。利拉鲁肽的暴露程度随剂量成比例增加。单次给予利拉鲁肽，药时曲线下面积((AUC)的个体内变异系数为11%。利拉鲁肽皮下注射后的绝对生物利用度约为55%。分布皮下注射后的表观分布容积为11-17L。利拉鲁肽静静脉注射后的平均分布容积为0.07L/kg。利拉鲁肽可与血浆蛋白广泛结合(>98%)。

本品用于成人2型糖尿病患者控制血糖：适用于单用二甲双胍或磺脲类药物最大可耐受剂量治疗后血糖仍控制不佳的患者，与二甲双胍或磺脲类药物联合应用。

国内外关于利拉鲁肽制备报道的报道很多，如中国专利CN201110271342.3提供了一种固相合成法，以Wang树脂为起始原料，以Fmoc保护的氨基酸为单体，依次逐个接上氨基酸得到线性利拉鲁肽树脂，采用TFA裂解获得粗品，最后采用反相高效液相色谱法纯化，获得利拉鲁肽，未规定+Gly和-Gly杂质；中国专利201210369966.3采用片段合成的制备方法。

上述制备方法存在以下不足，在制备利拉鲁肽过程中，由于Gly结构特点，接入Gly时会发生多接入一个Gly或漏接一个Gly的副反应，所以在接入Gly的时候会产生[+1Gly]-利拉鲁肽和[-1Gly]-利拉鲁肽杂质，从而降低粗品纯度，这些杂质极性与利拉鲁肽非常接近，增大粗品纯化难度，降低了产品收率。

发明内容

本发明要解决的技术问题是现有方法操作繁琐、粗品不易纯化、产品收率低。

本发明解决上述技术问题的技术方案是提供一种制备利拉鲁肽的方法，包括：N端保护的GLP1(7-37)肽段在碱的作用下与N^α-PAL-γ-Glu(OtBu)-ONSu发生偶联反应，得到利拉鲁肽保护肽；利拉鲁肽保护肽去N端保护后，经酸解后得到利拉鲁肽粗品；利拉鲁肽粗品纯化得利拉鲁肽纯品；所述的GLP1(7-37)肽段序列为：

R-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-

Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-

Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly-OH；

其中R为Fmoc、Dde或ivDde。