[发明专利]利拉鲁肽的制备方法

权利要求书

1.利拉鲁肽的制备方法，包括：采用固相多肽合成法制备利拉鲁肽肽树脂，利拉鲁肽肽树脂再经酸解得到利拉鲁肽粗品，最后利拉鲁肽粗品纯化得到利拉鲁肽纯品；其中固相多肽合成法制备利拉鲁肽肽树脂的步骤为：在Fmoc-Gly-载体树脂上通过固相偶联合成法依次接入下列序列中相对应的保护氨基酸或片段，制备利拉鲁肽肽树脂：

Boc-W(Trt)-X(OtBu)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-

Asp(OtBu)-Val-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Leu-X(OtBu)-

Gln(Trt)-Ala-Ala-Lys[Y(α-OtBu)]-Glu(OtBu)-Phe-Ile-Ala-

Trp(Boc)-Leu-Val-Z(Pbf)-Arg(Pbf)-Gly-树脂；

其中，W为His-Ala，X为Glu-Gly，Y为Nα-PAL-Glu，Z为Arg-Gly。

2.根据权利要求1所述的利拉鲁肽的制备方法，其特征在于：采用一步接入法或两步接入法：（1）采用一步接入W，对应的保护氨基酸为Boc-His(Trt)-Ala-OH；或（2）采用两步接入W，对应的保护氨基酸为Fmoc-Ala和Boc-His(Trt)-OH。

3.根据权利要求1或2所述的利拉鲁肽的制备方法，其特征在于：接入X时，对应的保护氨基酸为Fmoc-Glu(OtBu)-Gly-OH。

4.根据权利要求1～3所述的利拉鲁肽的制备方法，其特征在于：采用一步接入Y，对应的保护氨基酸为Nα-PAL-Glu(α-OtBu)-OH；或采用两步接入Y，对应的保护氨基酸为Fmoc-Glu(α-OtBu)-OH和PAL。

5.根据权利要求1～4任一项所述的利拉鲁肽的制备方法，其特征在于：接入Z时，对应的保护氨基酸为Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-OH。

6.根据权利要求1～5任一项所述的利拉鲁肽的制备方法，其特征在于：接入Lys时，使用的保护氨基酸为Fmoc-Lys(Alloc)、Fmoc-Lys(Dde)或Fmoc-Lys(ivDde)-OH。

7.根据权利要求1所述的利拉鲁肽的制备方法，其特征在于：所述的Fmoc-Gly载体树脂是将载体树脂与Fmoc-Gly-OH偶联得到的；其中，所述Fmoc-Gly-载体树脂的Fmoc-Gly取代值为0.2～1.0mmol/g树脂；优选的Fmoc-Gly-取代值为0.3～0.5mmol/g树脂。

8.根据权利要求1所述的利拉鲁肽的制备方法，其特征在于：所述的固相偶联合成法为：前一步反应得到的保护氨基酸-树脂脱去Fmoc保护基后再与下一个保护氨基酸偶联反应。

9.根据权利要求1～8任一项所述的利拉鲁肽的制备方法，其特征在于：利拉鲁肽肽树脂经酸解同时脱去树脂及侧链保护基得到利拉鲁肽粗品：

His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-

Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys(Nα-PAL-γ-Glu)-

Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly-OH。

10.根据权利要求9所述的利拉鲁肽的制备方法，其特征在于：所述利拉鲁肽肽树脂酸解时采用的酸解剂为三氟醋酸、1,2-乙二硫醇和水的混合溶剂；其中，混合溶剂的体积配比为：TFA为80～95%，EDT为1～10%，余量为水；优选的，混合溶剂的体积配比为：TFA为89～91%、EDT为4～6%，余量为水；最优的，混合溶剂的体积配比为：TFA为90%、EDT为5%，余量为水。