[发明专利]一种制备高腺苷含量的虫草制剂的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物工程领域，具体涉及一种虫草制剂的制备方法。

背景技术

迄今为止，人们已从冬虫夏草（Cordyceps Sinensis(Berk.)Sacc.)及其无性型中检测或分离到多种生物活性物质，如真菌多糖、甾醇、生物碱、有机酸、维生素、氨基酸、甘露醇等。这些有效成分均与冬虫夏草的药理功能有密切关系。

腺苷即3’-脱氧腺苷(3’-Deoxyadenosine)，又称虫草素或蛹虫草素，它是第一个从真菌中分离出来的核苷类抗生素。其分子式为C₁₀H₁₃N₅O₃，分子量为251Da，熔点230-231℃，溶于水、热乙醇和甲醇，不溶于苯、乙醚、氯仿，蒽酮反应为阳性，紫外线的最大吸收波长为259nm，其结构式如下：

腺苷含量是冬虫夏草发挥药理功效的主要活性成分，是检测冬虫夏草内在质量的主要指标，也是国家检测这类产品内在质量的标准。

目前，市场上销售的冬虫夏草制剂中，其腺苷含量都比较低，如当前正在中央电视台和北京晚报上宣传的一个虫草胶囊产品，其100g中仅含有腺苷4.4mg，实际上如此低的腺苷含量的虫草制剂根本不具备宣传中所说的生理活性和药理功能。因此，如何在技术路线及加工工艺中改进现有加工方法，提高虫草制剂的腺苷含量已是亟待解决，而又具有重要意义的课题。

发明内容

本发明的目的在于：将冬虫夏草制剂中的腺苷含量显著提高。

本发明的上述目的是通过以下技术方案实现的：

提供一种制备高腺苷含量的虫草制剂的方法，包括以下步骤：

1）将分离自虫草子实体的真菌类菌株经固体培养和摇床培养后，得到菌丝体；

2）将步骤1）得到的菌丝体接种到含有木薯蚕蛹水提液的培养液中进行深层发酵，得到深层发酵菌丝体；

3）超高压处理步骤2）得到的深层发酵菌丝体，使菌丝体和微生物瞬间破壁；然后离心发酵液，分离得到菌丝体和菌液；

4）步骤3）得到的菌液精滤后经低温浓缩制成高腺苷含量的虫草口服液，菌丝体经低温干燥后，超微粉碎成高腺苷含量的纳米级虫草微粉。

步骤1）所述的分离自虫草子实体的真菌类菌株可以是现有技术中公众可不受约束地购买到的多种虫草菌株，例如中华被毛孢、蝙蝠蛾拟青霉、被包霉属、北虫草菌r3、头孢菌改良菌株A10等菌株。本发明方法中优选被包霉属、蝙蝠蛾拟青霉或中华被毛孢；最优选中华被毛孢（Hirsutella Sinensis）菌株，该菌株是一种现有的优良菌株，可无限制地购自中国科学院微生物研究所。

步骤1）所述的固体培养可以是使用现有技术中的多种固体培养基进行的固体培养，本发明优选的培养基是PDA斜面培养基。

所述的PDA斜面培养基中，按重量百分比计，优选含有10-20%的马铃薯、2-3%的葡萄糖、1-3%的琼脂。

所述的固体培养条件优选18-25℃，pH值为5-6，培养时间为8-10天。

步骤1）所述的摇床培养的液体培养基优选每1000毫升中含有葡萄糖60-100克，酵母粉20-80克、蛋白胨水解液3-10毫升，0.1-1g的MgSO₄·7H₂O，0.1-1g的KH₂PO₄，pH值为5-6。

所述的摇床培养可以按照现有技术的常规条件进行，本发明优选的摇床培养条件是温度为18-25℃，转速为180-210rpm，时间为2-5天。

步骤2）所述的木薯蚕蛹水提液是木薯蚕蛹经常规水提方法得到的水提液，例如，将木薯蚕蛹粉碎后加水煎煮1-3次，每次加2-4倍体积的水，每次煎煮0.5-1小时，合并煎液后过滤，得到的滤液即可作为本发明所采用的木薯蚕蛹水提液。

步骤2）所述的深层发酵培养液中，每1000毫升中优选含有1-12克干重的木薯蚕蛹粉制得的水提液。

步骤2）所述的深层发酵培养液进一步优选每1000毫升中含有葡萄糖60-100克，酵母粉20-80克、蛋白胨水解液30-100毫升，由1-12克木薯蚕蛹粉制得的水提液，0.1-1g的MgSO₄·7H₂O，0.1-1g的KH₂PO₄，pH值为5-6。