[发明专利]一种大黄鱼抗菌肽hepcidin基因启动子序列及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗菌肽基因启动子，尤其是涉及一种大黄鱼抗菌肽hepcidin基因启动子序列及其应用。

背景技术

Hepcidin是近年来新发现的一类具有独特性质的小分子抗菌肽。Krause等（1.Krause A,Neitz S,HJ,et al.LEAP-1,a novel highly disulfide-bonded human peptide,exhibits antimicrobial activity[J].FEBS Lett,2000,480:147-150）首次从人血液中分离纯化了一条小分子抗菌肽，并将其命名为肝脏表达的抗菌肽(LEAP1)。随后，Park等（2.Park C H,Valor e E V,Waring A J,et al.Hepcidin,a urinary antimicrobial peptide synthesized in the liver[J].J Biol Chem,2001,276(11):7806-7810）从人尿液中也分离到这条小分子抗菌肽，并将其命名为hepcidin。目前，编码hepcidin的基因已从包括鱼类在内的各种脊椎动物中相继得到克隆。与其他抗菌肽不同，hepcidin在各物种间具有较高的结构保守性，一般在成熟肽区域含有8个保守的半胱氨酸，可形成4对二硫键，使其分子结构高度紧缩（3.Hunter H N,Fulton D B,Ganz T,et al.The solution structure of human hepcidin,a peptide hormone with antimicrobial activity that is involved in iron uptake and hereditary hemochromatosis[J].J Biol Chem,2002,277(40):37597-37603）。研究表明，hepcidin具有广泛的抗细菌、病毒、真菌和原生动物的生物学活性（4、Cuesta A，Meseguer J，Esteban M A.The antimicrobial peptide hepcidin exerts an important role in the innate immunity against bacteria in the bony fish gilthead seabream[J].Mol Immunol，2008，45(8):2333–2342）。最近研究表明，hepcidin在维持机体铁平衡中起着关键性的调控作用，参与多种代谢疾病的发病过程（5.Nemeth E and T Ganz.Regulation of iron metabolism by hepcidin[J].Annu Rev Nutr,2006,26;323-42.）。鉴于hepcidin功能的重要性，研究其基因表达调控机制以实现对其基因表达的准确控制显得尤为重要。Courselaud等（6、Courselaud B，Troadec MB，Fruchon S，et al.Strain and gender modulate hepatic hepcidin1and2mRNA expression in mice[J].Blood Cell Mol Dis，2004，32：283-289）对人和鼠hepcidin基因5’侧翼序列的启动子活性进行了分析，发现它们在人肝细胞瘤及鼠肝细胞中具有很强的启动子活性。进一步研究发现hepcidin启动子区域存在多个转录因子结合位点，其具有复杂的表达调控机制。

目前，hepcidin基因已从近20个鱼种中相继得到克隆。与人类及其他哺乳类动物只存在一个hepcidin基因拷贝不同（除鼠具有两个hepcidin基因拷贝外），鱼类hepcidin基因存在多个基因拷贝，如真鲷Pagrosomus major、鲈鱼Lateolabrax japonicus、石斑鱼Epinephelus drummondhayi、黑鲷Sparus macrocephlus等鱼种hepcidin均存在多个基因拷贝（7、王克坚，海洋鱼类和青蟹抗菌肽hepcidin和scygonadin的研究[J].厦门大学学报(自然科学版)，2011，50(2)：418-424）。一些鱼类hepcidin基因的组织表达谱及在免疫刺激条件下的表达调控也已明确。然而，目前对鱼类hepcidin基因的表达调控机制仍不清楚。