[发明专利]一种有抑菌功能的黑曲霉H菌、活性腐解剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于微生物在农业方面应用技术，主要涉及一种有抑菌功能的活性腐解剂及其制备方法。 

背景技术

我国每年可产农作物秸秆5亿吨以上，而畜禽粪便的产生量高达30-40亿吨，用秸秆和畜禽粪便制作肥料，不仅可以减少污染，还可变废为宝。传统堆肥方法处理畜禽粪便和秸秆，周期长、需要较大的堆沤空间，所挥发的的甲烷、氨气等导致环境二次污染；近年来，国家大力推广秸秆腐熟剂促进秸秆直接还田。为此，各地研发出多种秸秆腐熟剂。如山东的金葵子秸秆腐熟剂、山东金利丰生物的腐熟宝微生物菌剂等，此外，还有一些国外进口产品。无论用几种微生物菌种组成，其功能主要是作为腐熟剂。 

随着设施农业的快速发展，连作和大量使用化肥农药，使设施土壤养分失衡，土壤酸化、板结，土传病害频繁发生，严重制约了设施生产的可持续发展。为此，利用微生物的广泛适应性和多功能性来转化秸秆和畜禽粪便，同时，抑制土传病害的发生已引起人们的重视，将成为国内外研究的重点。 

发明内容

本发明的目的是提供一种有抑菌功能的活性腐解剂及其制备方法。该腐解剂由黑曲霉H菌发酵而成；发酵用农副产品及其下脚料，原料易得，成本低廉；曲盘生产，配方优化，发酵产物效价高；不仅快速腐解秸秆和畜禽粪便等有机物料，还有抑制土传病原菌、抑制番茄枯萎病等功效。 

为实现上述本发明的目的，本发明的技术方案是： 

1.本发明提供一株有益真菌： 

一株黑曲霉菌（Aspergillus niger ）（曾用名H菌），菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；地址:中国,北京市朝阳区北辰西路1号院3号,邮政编码:100101，保藏编号为CGMCC N0.7465，保藏日期为2013年 4月12日。 

黑曲霉H菌株的获得过程 

分离和筛选过程：本发明中的黑曲霉H菌株是本发明人从山西省农科院秸秆反应堆中分离，并经紫外线诱变获得。其分离过程：采集已腐熟的秸秆，称取10g，放置在装有玻璃珠的90ml无菌水中，剧烈振荡30分钟，静置5分钟。吸取稀释液1ml,加入放置滤纸条（5cm×1cm）的纤维素分解菌液体培养基中，置28℃恒温培养5～10d，逐日观察记载菌液对滤纸条的分解效果。选滤纸条分解快的菌液，采用梯度稀释分离单菌落若干。按上述步骤，逐个验证其对滤纸条的分解效果。选分解效果最佳的菌株，反复纯化后，除在平板上观察菌落形态，还用凹玻片半固体悬滴法，定时观察菌丝、孢子囊、孢子梗、孢子等形态，确定其为黑曲霉，保存于液体石蜡斜面试管和麸皮试管中。 

紫外线（UV）诱变过程：将筛选的黑曲霉出发菌株的菌悬液稀释至5×10⁷cfu/mL，在距离紫外灯30-40cm处，辐照3-5min，将菌悬液梯度稀释涂平板，挑取存活菌落至自制的半纤维素培养基上，观察水解透明圈（D）与菌落（d）的大小，选取D/d值大于出发菌株的菌落进行纯化，通过测定纤维素酶、木聚糖酶、果胶酶、β-葡聚糖酶，最终筛选出诱变菌株(经中国科学院微生物所鉴定为黑曲霉)，定名黑曲霉H菌株。该菌液体发酵产物总酶活性比出发菌株高14.9%，其固体曲盘发酵产物的木聚糖酶和β-葡聚糖酶分别高于文献中同类菌株发酵产物1.86倍和6倍之多【赵林果等饲料研究2011.1】。 

所述的黑曲霉H菌用于有机物料的腐解，也可用于抑制土传病害。又可用于抑制番茄枯萎病。 

2.本发明提供黑曲霉H活性腐解剂及其制备方法 

一种黑曲霉H菌活性腐解剂，其特征在于：该活性腐解剂是由黑曲霉H菌固体发酵而成。 

所述的黑曲霉H菌活性腐解剂的制备方法，其特征在于：包括以下步骤： 

（1）菌种活化：取液体石蜡中冷藏保存的黑曲霉H，划线接种于PDA斜面 培养基上，在温度为26～33℃条件下，培养60～72h，连续转管2次使菌种得到活化，备用； 

（2）种子液培养：将活化菌种接种于装有100mL马铃薯葡萄糖培养液的250mL三角瓶中，在温度为26～33℃条件下，以150～200r/min转动三角瓶，摇匀种子液培养，恒温培养48～60h作为种子液，备用； 

（3）菌剂制备：用各种廉价易得的农副产品做发酵料，将黑曲霉H菌种子液按3～10%的比例接入经高压灭菌1h的发酵料中； 

（4）在温度为26～33℃条件下，静止培养50～72h，经风干后获得活菌数≥2×10⁹cfu/g的干基培养物，即为含黑曲霉H菌的活性腐解剂。