[发明专利]铁皮石斛的快速繁殖方法

说明书

技术领域

本发明属于药用植物人工种植技术领域，具体涉及兰科植物铁皮石斛的快速繁殖方法。

背景技术

铁皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo），为兰科石斛属多年生草本植物，主要分布于云南、安徽、贵州、浙江、江西等地，为一种珍稀的中药材。因其具有滋阴清热、生津益胃、润肺止咳等功效,位列“中华九大仙草之首”,并被录入2010版药典。其主要药用成分为铁皮石斛多糖、生物碱、氨基酸和其他微量成分。现代药理学表明，铁皮石斛具抗肿瘤、抗氧化、抗衰老、增强人体免疫力、抑制肿瘤和降低血糖等作用及扩张血管的作用。其特殊的药理药效作用，使这一植物的野生资源受到了人为的大规模、掠夺式开采，因而使铁皮石斛的野生资源紧缺，甚至濒临灭绝。

铁皮石斛种子没有胚乳，在自然条件下发芽率低，生长缓慢，人工自花传粉成功率较低，且对生长环境要求苛刻（天然状态下主要生长于悬崖峭壁），其已无法满足日益增长的市场需求。而组织培养是目前铁皮石斛种苗生产的重要途径,也是挽救这一濒危物种的有效途径。发明人所在的研究小组对于铁皮石斛外植体诱导愈伤，愈伤组织继代及诱导其长成生根苗的技术已十分成熟。一般从生根苗到出瓶苗需要转接培养基一次，此阶段是铁皮石斛在组培瓶内生长的最快时期，同时也是产生畸形苗，出现组培瓶开花的主要时期，因此寻求一组影响铁皮石斛生根苗生长的关键激素和添加物是十分必要的。

关于组培苗移栽的基质筛选也是目前国内一些科研工作者和种植者研究的重点，民间有用树皮作为移栽基质的传统做法，但关于铁皮石斛基质的研究，有不同的基质配方和比例。目前，国内大多数以MS培养基为基本培养基，添加不同激素及不同添加物，但是在培养过程中经常遇见产生畸形苗，甚至出现组培苗开花现象，并且存在组培苗生长慢、生物积累率低的现象。目前有关组培苗的大田移栽基质均采用树皮、木屑、苔藓等按照一定比例混合，基质不同移栽成活率也尽相同，但至今没有一种既满足铁皮石斛的生长发育，又能有效利用当地的材料作为移栽材料的基质。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于克服铁皮石斛种植转接培养和大田移栽过程中存在的缺点，提供一种成本低，组培苗生长快、移栽成活率高的铁皮石斛快速繁殖育苗的方法。

解决上述技术问题所采用的技术方案由下述步骤组成：

1、配制铁皮石斛转接培养基

向MS培养基中添加萘乙酸、香蕉汁、多效唑，用蒸馏水定容，用0.1mol/L的NaOH水溶液调节pH值至5.8～6.0，121℃灭菌20分钟，配制成铁皮石斛转接培养基，铁皮石斛转接培养基中萘乙酸浓度为0.1～0.9mg/L、香蕉浓度为50～150g/L、多效唑浓度为0.1～2.0mg/L。

2、铁皮石斛组培苗的转接培养

选取组培室中株高为1～3cm、长出2～3片真叶且根系发育完整的铁皮石斛组培苗，在超净工作台上将组培苗转接至步骤1配制的铁皮石斛转接培养基上，置于温度为25±2℃、光照强度2000～3000Lx、光照12h/12h的组织培养室培养。

3、炼苗

将步骤2中转接培养后株高为5～6cm、根长为1～1.5cm的铁皮石斛幼苗做炼苗处理。

4、配制铁皮石斛大田移栽基质

将直径为3～5cm的木块与直径为3～5cm的石块按照体积比为2:1混匀后铺在苗床上，铺的厚度为5～8cm，木块与石块的混合物上面铺一层厚度为5～10cm的发酵过的树皮粉与腐殖质、珍珠岩的体积比为1:0.5～1:0.5～2的基质，在基质上方铺一层厚度为0.5～2cm的鲜苔藓，配制成铁皮石斛大田移栽基质。

5、移栽

将炼苗处理后的铁皮石斛幼苗按3～4株一穴移栽到步骤4配制的铁皮石斛大田移栽基质中。

本发明的配制铁皮石斛转接培养基步骤1中，向MS培养基中添加萘乙酸、香蕉汁、多效唑，用蒸馏水定容，用0.1mol/L的NaOH水溶液调节pH值至5.8～6.0，121℃灭菌20分钟，配制成铁皮石斛转接培养基，铁皮石斛转接培养基中萘乙酸浓度最佳为0.5mg/L、香蕉浓度最佳为75g/L、多效唑浓度最佳为0.9mg/L。

本发明的配制铁皮石斛大田移栽基质步骤4中，将直径为3～5cm的木块与直径为3～5cm的石块按照体积比为2:1混匀后铺在苗床上，铺的厚度为5～8cm，最佳在木块与石块的混合物上面铺一层厚度为5～10cm的发酵过的树皮粉与腐殖质、珍珠岩的体积比为1:0.5:0.5的基质，在基质上方铺一层厚度为0.5～2cm的鲜苔藓，配制成铁皮石斛大田移栽基质。