[发明专利]一种凝血因子Ⅸ的单克隆抗体

权利要求书

1.一种抗凝血因子IX的单克隆抗体及其片段，包括轻链CDR1-3和重链CDR1-3，其特征在于，所述轻链CDR1-3的氨基酸序列为：

CDR1：如序列表中SEQ ID NO：5所示；

CDR2：如序列表中SEQ ID NO：6所示；

CDR3：如序列表中SEQ ID NO：7所示；

所述重链CDR1-3的氨基酸序列为：

CDR1：如序列表中SEQ ID NO：8所示；

CDR2：如序列表中SEQ ID NO：9所示；

CDR3：如序列表中SEQ ID NO：10所示。

2.如权利要求1所述的单克隆抗体及其片段，其特征在于，所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO：1所示，所述重链可变区的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO：2所示。

3.如权利要求1-2任意一项所述的单克隆抗体或其片段，其特征在于，所述轻链可变区的核甘酸序列如序列表中SEQ ID NO：3所示，所述重链可变区的核甘酸序列如序列表中SEQ ID NO：4所示。

4.权利要求1-3任意一项所述的单克隆抗体或其片段在制备检测凝血因子IX的试剂、药剂或试剂盒中的应用。

5.权利要求1-3任意一项所述的单克隆抗体或其片段在纯化和/或制备凝血因子IX中的应用。

6.一种纯化凝血因子IX的方法，具体步骤如下：

1)亲和层析柱的制备：将层析柱树脂CNBr-activated Sepharose4B放至1mM HCl中溶胀，然后用1mM HCl充分洗涤，将权利要求2所述的抗体溶于偶联缓冲液(0.1M NaHCO₃，0.5M NaCl，pH8.3)中，4℃摇动过夜，用偶联缓冲液洗去未偶联到树脂上的抗体分子，树脂上多余的活性基团则用0.1M Tris-HCl pH8.0封闭。抗体-树脂偶联物先后用两种缓冲液洗涤，分别为0.1M醋酸钠缓冲液和0.1MTris-HCl缓冲液，轮流洗3个循环，按层析柱说明书装柱，用平衡缓冲液(50mM Tris-HCl，pH7.5)4℃平衡过夜。

2)纯化：将血浆离心收集上清，并用0.45μm微孔滤膜过滤后上样，流速为0.5-4ml/min。用平衡缓冲液(50mM Tris-HCl，pH7.5)洗至基线，用5个柱床体积洗脱缓冲液(0.1M Glycine-HCl，pH2.0)洗脱，收集洗脱峰。用中和液(1M Tris-HCl pH9.0)调节pH至7.0，中和液即为含有凝血因子IX的溶液。

7.根据权利要求6所述的纯化凝血因子IX的方法，其特征在于，其中所述的0.1M醋酸钠缓冲液含有0.5M NaCl，所述的0.1M Tris-HCl缓冲液含有0.5M NaCl。