[发明专利]一种快速检测食品中牛乳过敏原的装置及其制备方法

权利要求书

1.一种快速检测食品中牛乳过敏原的装置，其特征在于包括用于检测牛乳过敏原的免疫层析试纸条； 所述免疫层析试纸条为粘性底板上依次搭接滤纸、样本垫、玻璃纤维膜、NC膜和吸水纸； 所述玻璃纤维膜上喷涂的荧光微球垫为荧光微球标记的牛乳过敏原多克隆抗体； 所述NC膜的检测区喷涂牛乳过敏原； 所述NC膜的质控区上喷涂羊抗兔IgG； 所述所述荧光微球是直径为0.01～10 μm的用聚合材料或二氧化硅包裹荧光物质的微球，其表面连接有活性基团。

2.如权利要求1所述的装置，其特征在于还包括底卡和面卡，免疫层析试纸条固定在底卡上，试纸条表面用面卡压紧；所述面卡上预留有加样孔和观察窗，加样孔的位置与试纸条的样本垫对应，观察窗的位置与试纸条的NC膜对应，所述底卡和面卡为塑料卡。

3.如权利要求1所述的装置，其特征在于所述聚合材料为聚苯乙烯、聚乙烯和聚氯乙烯，所述的活性基团为－CHO、-COOH、-OH、-NH₂ 或-SH，所述荧光物质为菲咯啉联钌有机染料、异硫氰根荧光素、异硫氰根罗丹明、6-羧基荧光素酰胺酯、荧光烷衍生物类、1,8-萘二酰亚胺类、香豆素类有机荧光染料或其掺杂物或量子点；所述牛乳过敏原用0.01～0.1 M pH 7.2的磷酸盐缓冲液调节至包被物浓度为1.0 mg/mL，喷膜量为0.80 μL/cm；所述羊抗兔IgG用0.01～0.1 M pH 7.2的磷酸盐缓冲液调节至包被物浓度为1.0 mg/mL，喷膜量为0.80μL/cm。

4.权利要求1所述的装置的制备方法，其特征在于包括如下步骤： (1) NC膜上检测区和质控区的制备；(2) 荧光微球垫的制备；(3) 装置组装； 所述的NC膜上检测区和质控区的制备，包括所述NC膜的检测区喷涂牛乳过敏原，牛乳过敏原用0.01～0.1 M pH 7.2的磷酸盐缓冲液调节至包被物浓度为1 mg/mL，喷膜量为0.8 μL/cm；所述NC膜的质控区上喷涂羊抗兔IgG，羊抗兔IgG用0.01～0.1 M pH 7.2的磷酸盐缓冲液调节至包被物浓度为1mg/mL，喷膜量为0.8 μL/cm； 所述的荧光微球垫的制备，包括如下的步骤：（1）荧光微球标记的牛乳过敏原多克隆抗体的制备（2）将荧光微球标记的牛乳过敏原多克隆抗体喷涂在玻璃纤维膜上制备荧光微球垫； 所述的装置组装为在粘性底板上依次搭接滤纸、样本垫、有荧光微球垫的玻璃纤维膜、固定有检测区和质控区的NC膜、吸水纸制成免疫层析试纸条，并剪成合适大小。

5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于所述检测区和质控区的制备方法如下：用BIODOT Dispensing System将牛乳过敏原和羊抗兔IgG包被到NC膜上：分别用0.01～0.1 M pH 7.2的磷酸盐缓冲液调节包被物浓度为1 mg/mL，喷膜量为0.8 μL/cm，检测区上喷涂牛乳过敏原，质控区上喷涂羊抗兔IgG，两区相隔5 mm；37℃烘干处理过夜后，室温干燥的环境下保存备用。

6.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于荧光微球标记的牛乳过敏原多克隆抗体制备方法如下：取微球在1000×g离心10～15 min，离心后收集沉淀，用0.01 M pH 4.8的硼酸盐缓冲液调节微球浓度为OD₄₅₀=0.2，然后分别加入20～100 mg/mL对乙基-N，N- 二甲基丙基碳二亚胺EDC，和2～20 mg/mL N-羟基丁二酰亚胺NHS，振荡混匀，室温孵育10～30 min后，1000×g 离心5～15 min，沉淀用0.01 M pH 4.8的硼酸盐缓冲液溶解，并调节微球浓度为OD₄₅₀为0.2-1.0，1 mL该荧光微球中加入0.1～100 μg的牛乳过敏原多克隆抗体，充分混合后，室温搅拌反应1～4 h；超纯水离心洗涤2～5次，沉淀用0.01 M pH 7.2的磷酸盐缓冲液复溶沉淀至起始体积；用BIODOT Dispensing System将标记好的荧光微球喷涂至玻璃纤维膜上，25℃真空干燥1～2 h，置于室温干燥的环境下备用。