[发明专利]一种分离/富集食品中痕量环丙沙星的方法

说明书

技术领域

本发明属于环境分析技术领域，涉及一种分离/富集食品中痕量环丙沙星(CIP)的新方法，特指以环氧乙烷与环氧丙烷的无规共聚物（EOPO）为萃取剂，以无机盐磷酸氢二钾(K₂HPO₄)作为分相的盐析剂，形成双水相体系（ATPS）分离/富集食品中痕量环丙沙星的方法。

背景技术

环丙沙星是全合成的第三代哇诺酮类抗菌药, 具有抗菌谱广, 内在活性高, 穿透力强, 与其他抗菌药不易产生交叉耐药等特点, 因而临床上已广泛应用于各种全身感染。同时，从细菌核深处破坏了细菌的代谢和增殖，能迅速把细菌杀死，杀菌效果稳定，也广泛用于水产养殖中疾病的治疗，成为水产养殖中最重要的抗感染药物之一。但是，由于环丙沙星广泛的使用，在水产动物体内的残留增强了致病菌的耐药性，直接威胁公共卫生安全和生物安全、污染了自然环境，对人可以引起皮肤过敏、心动过速、胃肠道反应、光敏性皮肤病等副作用。美国等国家将其列入禁止在食品动物使用的兽药及其化合物清单。为了消费者健康，必须监控各种水产品药物残留，为此需要可靠的分析方法来监测这些药物残留。

样品分析最重要的环节是样品的前处理，它对分析方法的可靠性、准确性有重要影响。由于环境样品具有被测物浓度低、组分复杂、干扰物多，故一般都要经过前处理才能进行分析测定。目前，环丙沙星类抗生素残留的前处理方法主要为液-液萃取法、固相萃取法、基质固相分散萃取法、固相微萃取法、超临界萃取法、加压溶剂萃取法、超声波提取法和双水相萃取法。其中最常用的是固相萃取法，但是固相萃取使用有机溶剂，对环境污染较大，并且解吸附过程操作非常耗时。因此，需要建立一种高效、无毒、无污染的绿色分离/富集方法。

双水相体系是一类新型萃取分离体系，它是由两种聚合物或一种聚合物和一种盐的水溶液在一定浓度下混合自发形成的两相体系，具有无毒、无污染、萃取条件温和、样品易分离、操作简单等优点。与传统的双水相萃取体系相比，功能性聚合物-盐双水相体系使用的温敏性聚合物成本低且易于温度分离回收，分相时间短，萃取组分可以循环利用，达到绿色化学的目的。

1955年由Albertson首先利用双水相技术来分离生物分子，在随后的几十年中，这项技术有了长足的发展。近几年来，双水相技术在动力学研究、双水相亲和分离、多级逆流层析、反应分离耦合等方面都取得了显著的成绩。由于其操作条件温和、有机溶剂用量少、可调节因素多及易于工业化放大和操作等，广泛用于物质的提取和分离富集。

发明内容

本发明建立了一种全新的样品前处理体系—温敏性聚合物/盐双水相体系 (ATPS)。该方法将温敏性聚合物EOPO与盐两相混合，它利用了表面活性剂在温度改变的情况下与水相亲和度改变的性质，结合无机盐形成双水相体系进行萃取分离的一种新的分离技术。这种新型的分离体系集双水相萃取优点，同时由于温敏性聚合物的温度分离性质，实现了二次萃取，使得萃取效率比一次萃取更高，同时相组分的回收利用，降低了实验成本。

本发明采用的技术方案是：

功能性聚合物盐双水相体系分离/富集食品中环丙沙星(CIP)，是以低成本的温敏性表面活性剂EOPO作为萃取溶剂，以磷酸氢二钾(K₂HPO₄)作为盐析剂对环丙沙星进行分离/富集的方法。

本发明具体步骤：一种分离/富集食品中痕量环丙沙星的方法，按照下述步骤进行：

（1）在磨口离心管中，首先加入分相盐溶液，再加入100ng/mL环丙沙星标准溶液，最后加入质量浓度为80%的EOPO溶液，其中试液体积V_{环丙沙星标准溶液}：V_{分相盐溶液}:V_eopo:V_总体积=（0.5：6.5：3:10）；其中V_总体积即双水相体系总体积，分相盐溶液为质量浓度为55%K₂HPO₄；