[发明专利]紫背天葵叶片一步成苗高效离体繁殖方法

说明书

技术领域

 本发明属于生物技术领域，涉及珍稀濒危植物快繁育苗的组织培养方法，具体涉及对药食同源植物秋海棠科紫背天葵的叶片组织培养的一步成苗快速繁殖方法。

背景技术

紫背天葵（Begonia fimbristipulata Hance）为秋海棠科秋海棠属肉质草本植物，中国特有物种，别名丹叶、红天葵、散血子，常见于海拔200~1 120 m的沟谷地带、悬崖石缝或疏林下长有苔藓的潮湿岩石上，喜温暖湿凉气候，一般呈簇生或丛生的居群分布，伴生植物有苔藓、小型蕨类、灌木等。紫背天葵在广东的深圳、东莞、肇庆和蕉岭等地均有分布，但以肇庆鼎湖山的紫背天葵最为有名，其模式标本即采自广东鼎湖山。紫背天葵分布虽广，但被限制在特殊的生境中，以云海雾气、烟云缭绕的山谷石壁处生长最佳，种群呈离散性分布，种群数量极易受到环境变化的影响。

紫背天葵叶富含花色苷，其味酸涩、性凉，既可入药，亦可作保健饮品，具清热解毒、止渴生津、活血消肿、润燥止咳的功效，全株具有较高的观赏价值和药用保健价值。然而，由于其险峻的适生环境、较低的生物产量，加上长期的破坏性采摘，导致野生资源日益枯竭，现已被《中国的珍稀植物》一书评估为濒危物种的低危等级 (Lower Risk, LR)。

紫背天葵种子繁殖萌发率极低，通过球茎进行分株繁殖系数较低、难以满足市场的需求。利用组织培养技术是加快紫背天葵大规模繁殖的有效途径。现有文献通常取其无菌苗叶片为外植体，进行胚状体的细胞诱导，或通过愈伤组织的诱导和再分化形成不定芽，或由不定芽、球茎芽或球茎等紫背天葵离体组织或器官分化出丛生芽，然后再转接到生根培养基诱导生根，最后形成完整的植株。再生植株（通常称为瓶苗）仍需要经过炼苗程序后才可移栽，最终形成商品种苗。可见，迄今紫背天葵的快繁技术仍然沿用传统的组织培养方式，要经过初代培养、继代培养、生根培养和炼苗移栽等多个阶段，程序繁琐，费工耗时，存在育苗周期长，种质易产生变异，成本较高等缺点。因此，有必要研究其简便、高效的一步成苗技术。一步成苗法就是外植体在脱分化后，不需要转移到分化培养基上，而是直接在原培养基上再分化，分化的顺序通常是先根后芽，直至形成健壮的全苗。它具有再生周期短，再生频率高，易操作，培养程序简单，不影响增殖率，保持原种特性和便于大规模生产等良好特征。

发明内容

本发明目的在于提供一种濒危植物紫背天葵一步成苗快速繁殖技术，达到一次外植体诱导即得到大量商品幼苗的效果。它能够显著简化育苗程序、缩短育苗周期、提高无性繁殖系数、降低了变异频率、而且操作简便，是实现紫背天葵优质种苗工厂化生产的有效途径。同时，可为同类植物的增殖与生根一体化繁殖提供技术依据。

本发明所述的一种紫背天葵叶片一步成苗高效离体繁殖方法，包括以下步骤：（1）培养基准备，包括：配制、分装、灭菌；所述培养基的配制是：每升MS基本培养基中添加6-苄氨基嘌呤即6-BA 0.25~0.5 mg、α-萘乙酸即NAA 0.4~0.8 mg、吲哚丁酸即IBA 0.2 mg、卡拉胶7 g、蔗糖30~40 g，混合后培养基的pH调节至6.0；所述培养基的分装是：将配制后的培养基加热至琼脂完全溶解，趁热均匀地分装于干净的培养瓶中；所述培养基的灭菌是：将加入培养基的培养瓶在121℃、105 Kpa下灭菌15 分钟，灭菌后冷却备用；（2）外植体处理和接种，包括：采用紫背天葵无菌苗叶片为外植体，直接进行无菌接种，即在无菌条件下，将组织培养无菌苗置于无菌工作台上切取叶片，将叶片接种于准备好的培养基上，无菌密封瓶口；（3）培养，包括：将接好种的培养瓶移入培养室进行幼苗的诱导与培养，形成健壮的紫背天葵再生苗丛，用于开瓶移栽；（4）再生植株移栽：不经炼苗，将步骤（3）得到的再生植株直接开瓶移栽至适宜的条件培养。

根据本发明所述的方法的进一步特征，所述步骤（1）中，所述培养基为：每升MS基本培养基中添加6-BA 0.25~0.5 mg、NAA 0.4~0.8 mg、IBA 0.2 mg、卡拉胶7g、蔗糖30~40g。 

根据本发明所述的方法的进一步特征，所述步骤（2）中，采用叶径为0.8~1.5 cm的紫背天葵无菌苗叶片为外植体，直接进行无菌接种。

根据本发明所述的方法的进一步特征，所述步骤（3）中，幼苗的培养条件为：温度为25±1 ℃，光照强度为8~10 μmol.m^-2.s^-1，光照时间为每天10小时，培养时间为70~80天。培养期间勤检查，发现污染苗及时去除。