[发明专利]紫背天葵叶片一步成苗高效离体繁殖方法

权利要求书

1.一种紫背天葵叶片一步成苗高效离体繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）培养基准备，包括：配制、分装、灭菌；

所述培养基的配制是：每升MS基本培养基中添加6-苄氨基嘌呤即6-BA 0.25~0.5 mg、α-萘乙酸即NAA 0.4~0.8 mg、吲哚丁酸即IBA 0.2 mg、卡拉胶7 g、蔗糖30~40 g，混合后培养基的pH调节至6.0；　

所述培养基的分装是：将配制后的培养基加热至琼脂完全溶解，趁热均匀地分装于干净的培养瓶中；　

所述培养基的灭菌是：将加入培养基的培养瓶在121℃、105 Kpa下灭菌15 分钟，灭菌后冷却备用；

（2）外植体处理和接种，包括：采用紫背天葵无菌苗叶片为外植体，直接进行无菌接种，即在无菌条件下，将组织培养无菌苗置于无菌工作台上切取叶片，将叶片接种于准备好的培养基上，无菌密封瓶口；

（3）培养，包括：将接好种的培养瓶移入培养室进行幼苗的诱导与培养，形成健壮的紫背天葵再生苗丛，用于开瓶移栽；

（4）再生植株移栽：不经炼苗，将步骤（3）得到的再生植株直接开瓶移栽至适宜的条件培养。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中，所述培养基为：每升MS基本培养基中添加6-BA 0.25~0.5 mg、NAA 0.4~0.8 mg、IBA 0.2 mg、卡拉胶7g、蔗糖30~40g。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤（2）中，采用叶径为0.8~1.5 cm的紫背天葵无菌苗叶片为外植体，直接进行无菌接种。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（3）中，幼苗的培养条件为：温度为25±1 ℃，光照强度为8~10 μmol.m^-2.s^-1，光照时间为每天10小时，培养时间为70~80天。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤（3）中，所述苗丛开瓶移栽前，以15 μmol.m^-2.s^-1光照强度加强光照10天。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤（4）中，簇生的组织培养苗直接或分散为带有3~5个植株的丛苗形式进行移栽。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤（4）中，移栽基质采用完全泥炭土，调节基质的pH缓冲范围在4.0~4.5之间。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤（4）中，移栽基质采用泥炭土:珍珠岩为3:1（V/V）的混合基质，调节基质的pH缓冲范围在4.0~4.5之间。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤（4）中，移栽后的培养条件为：白天温度为25℃，晚上温度为22℃，相对湿度为90%，光照强度15-18μmol.m^-2.s^-1，光照时间为每天12小时。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（4）中，移栽后的培养液为自来水或者1/4 MS培养液。