[发明专利]在线亲水相互作用色谱/反相色谱串联接口装置及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及液相色谱技术领域，具体的说，是一种在线亲水相互作用色谱/反相色谱串联接口装置，实现了在线的亲水相互作用色谱/反相色谱直接相互串联。

背景技术

亲水相互作用色谱（HILIC）作为一种分离极性化合物的液相色谱模式，最早由Alpert于1990年提出（Alpert J.,J.Chromatogr.A,1990,400:177）。其主要特征是：使用类似于正相色谱的极性固定相和水/有机溶剂（通常是乙腈）流动相（其中水是强洗脱溶剂）。已有不少研究表明，当使用水-水溶性有机溶剂做流动相时，亲水性的固定相表面会含有一层富水层，样品在HILIC上的保留包含分配机理（Ulrich T.Angew.Chem.Int.Edit.,2012,51,6251-6254）。此外，HILIC还具有与反相色谱（RP）相媲美的柱效和对称的峰形，又能与多种检测器有良好的兼容性。随着蛋白质组学的发展，一方面，HILIC模式对强极性化合物和亲水化合物具有很好的保留和分离选择性，因此越来越多的蛋白质和多肽样品等强极性化合物需要利用HILIC进行选择性分离；另一方面，HILIC的分离机理与RP完全不同，两者的分离选择性具有很好的正交性，而且两者的流动相体系十分类似，十分适合构建HILIC/RP色谱系统，相对于其他联用模式具有更高的正交性，在蛋白组学具有非常大的发展潜力。

然而，在实际应用中，RP中作为强洗脱剂的有机相在HILIC中是流动相的弱洗脱剂，而在RP中作为弱洗脱剂的水却是HILIC中的强洗脱剂，其含量高低会显著影响组分在柱上的保留。这种流动相的不兼容性导致这两种分离模式无法直接实现在线联用，因此HILIC与RP的直接在线串联一直以来都是一个难题。针对此问题，本发明设计了一种惰性气体置换第一维色谱柱中残留溶剂的装置，除去了第一维色谱柱中残留的溶剂，实现了HILIC与RP的直接在线串联。该装置具有简单、实用、省时、高效的特点。实现样品在第二维色谱柱上的保留。

发明内容

本发明目的为了克服HILIC/RP串联中流动相的不兼容问题，提供了一种新型的在线HILIC/RP串联接口，具有价格低廉，操作简单，省时，实用，样品损失小，高效，通用性强等优点。

本发明的目的通过以下技术方案来实现：

一种在线亲水相互作用色谱/反相色谱串联接口装置，

可以是亲水相互作用色谱-反相色谱串联，也可以是反相色谱-亲水相互作用色谱串联；

在线亲水相互作用色谱/反相色谱串联接口装置：第一维色谱柱一端经第一切换阀通过管道分别与高压惰性气体源出口减压阀和高压恒流泵相连，另一端经第二切换阀通过管道分别与第二维色谱柱和第二废液相连；

通过进样，切换第一、第二切换阀和开关高压惰性气体源，高压惰性气体置换第一维色谱柱中残留的溶剂，实现样品在第二维色谱柱上的保留;

第一维色谱柱为亲水相互作用色谱，第二维色谱柱为反相色谱；或第一维色谱柱为反相色谱，第二维色谱柱为亲水相互作用色谱。

高压惰性气体源为不影响亲水相互作用色谱和反相色谱保留机理的所有惰性气体（如：氮气）。

所述的亲水相互作用色谱色谱柱可以是以氨基、多醇基、酰胺、两性离子等作为固定相的亲水相互作用色谱柱之一，反相色谱可以是以C18，C12，C8，C4等作为固定相的反相色谱柱之一。

所述的高压恒流泵是高效液相色谱所配备的高压恒流泵或其他提供动力的泵系统。

所述的切换阀可以是十通阀、八通阀、六通阀等切换阀中的一种。

所述的减压阀一端与高压惰性气体源相连，另一端通过切换阀与第一维色谱柱相连，减压阀调压范围可以从0MPa到20MPa不等。

所述的第一维色谱柱中残留的溶剂是会影响第二维色谱柱保留的溶剂。

所述的进样可以是定量环上的手动进样或自动进样器的自动进样。

所述的在线亲水相互作用色谱/反相色谱串联接口装置在小分子化合物及生物大分子（蛋白质、肽段、糖类、或脂类）分离中的应用。

所述第一切换阀通过管道与第一废液相连。

高压恒流泵与高压惰性气体源和切换阀1一端相连，切换阀1另一端与废液瓶1和第一维色谱柱相连，第一维色谱柱与切换阀2（6）一端相连，切换阀2的另一端与废液瓶2和第二维色谱柱相连。