[发明专利]一种制备奈西立肽的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种新的制备奈西立肽的方法。

背景技术

奈西立肽(Nesiritide)，由Suhoh于1988年从猪脑组织中分离出来，是内源性利钠家族的重要成员之一，主要由心脏分泌。其结构与心钠素相似，具有利钠、利尿、扩张血管和抑制肾素分泌等作用，主要用于治疗心力衰竭等，适用于患有休息或轻微活动时呼吸困难的急性失代偿心力衰竭患者的静脉治疗，其效果较好且副作用小，是一种很有市场前景的多肽药物。

奈西立肽的结构为：

关于奈西立肽的制备方法，国内外均有报道，US5114923以一种基因工程的方法制备奈西立肽，US20080287650报道以固相合成的方法制备奈西立肽。

中国专利CN200910104860.9和CN200910104861.3报道了一种固相制备和纯化的方法；CN201110171152.4报道了一种Ser-Ser-Ser-Ser片段的方法制备奈西立肽。

发明内容

在长肽合成中现有的固相合成容易产生缺省肽等副产物，大部分缺省肽性质与目的肽相似，导致难纯化、收率低。

本发明在SPPS(固相多肽合成)的基础上衍生出一种片段法固相制备奈西立肽的合成方法。

奈西立肽由32个氨基酸残基组成，因此存在海量的可能片段和偶联顺序。

1         5          10          15

H-Ser-Pro-Lys-Met-Val-Gln-Gly-Ser-Gly-Cys-Phe-Gly-Arg-Lys-Met-Asp-Arg-Ile-

    20                    25                    30

Ser-Ser-Ser-Ser-Gly-Leu-Gly-Cys-Lys-Val-Leu-Arg-Arg-His-OH

对此，本发明经过对不同片段偶联策略的实验之后，得到以下片段适合制备奈西立肽：序列(1-7)、序列(8-12)、序列(13-18)、序列(19-25)、序列(26-32)。

本发明提供一种制备奈西立肽的方法，包括以下步骤：

1)制备5个片段：

片段1，即序列(26-32)，H-Leu-Gly-Cys(Trt)-Lys(Boc)-Val-Leu-Arg(pbf)-Arg(pbf)-His(Trt)-载体树脂，

片段2，即序列(19-25)，Fmoc-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-OH，

片段3，即序列(13-18)，Fmoc-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Met-Asp(tBu)-Arg(Pbf)-Ile-OH，

片段4，即序列(8-12)，Fmoc-Ser(tBu)-Gly-Cys(Trt)-Phe-Gly-OH，和

片段5，即序列(1-7)，Fmoc-Ser(tBu)-Pro-Lys(Boc)-Met-Val-Gln(Trt)-Gly-OH；

2)将片段2和片段1偶联得到肽树脂I，即Fmoc-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Lys(Boc)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-His(Trt)-载体树脂；

3)将片段3和肽树脂I偶联得到肽树脂II，即Fmoc-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Met-Asp(tBu)-Arg(Pbf)-Ile-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Lys(Boc)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-His(Trt)-载体树脂；

4)将片段4和肽树脂II偶联得到肽树脂III，即Fmoc-Ser(tBu)-Gly-Cys(Trt)-Phe-Gly-OH-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Met-Asp(tBu)-Arg(Pbf)-Ile-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Lys(Boc)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-His(Trt)-载体树脂；