[发明专利]一种双氧水传感器、其制备方法及其在检测单细胞双氧水中的应用

权利要求书

1.一种双氧水传感器，包括铂电极和分布在铂电极上的负载铂纳米颗粒的多壁碳纳米管。

2.一种双氧水传感器的制备方法，其特征是，包括步骤如下：

（1）用细金相砂纸将铂丝电极打磨平滑，使得铂丝截面与毛细管截面平齐，将打磨好的铂电极分别在二次水、无水乙醇、二次水中超声清洗；

（2）称取多壁碳纳米管，加入H₂PtCl₆溶液和乙二醇，再加入氢氧化钾溶液，搅拌均匀，110°C～140°C下还原1～4h，再降至室温，用丙酮清洗过滤，将过滤得到的固体60-80°C下干燥10-14h，即得到负载铂纳米颗粒的多壁碳纳米管，将干燥后的固体放入Nafion溶液中，超声分散10-40min，得铂纳米颗粒/多壁碳纳米管分散液；

（3）将步骤（1）洗净后的电极蘸取铂纳米颗粒/多壁碳纳米管分散液，倒置自然晾干。

3.根据权利要求2所述的一种双氧水传感器的制备方法，其特征是，步骤（2）中所述的H₂PtCl₆溶液的浓度范围8～12g/L，氢氧化钾溶液的浓度范围0.02～0.05mol/L，碳纳米管与氯铂酸质量比为1:10-11，H₂PtCl₆溶液：乙二醇：氢氧化钾溶液的体积比1:10:2。

4.根据权利要求2所述的一种双氧水传感器的制备方法，其特征是，步骤（2）中所述的Nafion溶液为全氟磺酸-聚四氟乙烯共聚物用水和异丙醇稀释后的溶液，质量分数为0.1～1%，水和异丙醇体积比1:1。

5.根据权利要求2所述的一种双氧水传感器的制备方法，其特征是，步骤（2）中所述的铂纳米颗粒/多壁碳纳米管分散液中铂纳米颗粒/多壁碳纳米管浓度为1～10mg/mL。

6.根据权利要求2所述的一种双氧水传感器的制备方法，其特征是，步骤（3）中铂纳米颗粒与多壁碳纳米管质量比1:1～1:9，铂电极蘸取铂纳米颗粒/多壁碳纳米管分散液的时间为1～2s，次数为1～4次。

7.权利要求1所述的双氧水传感器在检测单细胞双氧水中的应用。

8.权利要求1所述的双氧水传感器检测单细胞内双氧水的方法，其特征是，步骤如下：

（1）中性粒细胞的提取：取新鲜抗凝血与全血及组织匀浆稀释液于离心管中混匀，20-30°C下静置30-40min，取上清液离心，分离出中性粒细胞层，细胞洗涤、破红细胞得中性粒细胞待测样；

（2）单个全细胞进样：将盛有磷酸盐缓冲溶液的自制进样池放在倒置显微镜的载物台上，选择放大倍数为400倍，将毛细管的进样端小心的插入进样池中，并将毛细管固定好，调节三维显微操纵器，使毛细管的进样端位于显微镜的观察视野范围内，事先烧掉毛细管进样端外壁2-3mm的聚酰亚胺涂层，再将中性粒细胞待测样放入自制进样池中，使其悬浮，后迅速将高压电源的正极也放入中性粒细胞待测样中，调节进样电压约为3.0kV，当单个中性粒细胞漂移到毛细管口附近时，在电渗流的作用下整个单细胞进入到毛细管内，然后将毛细管和高压电源的正极都放回缓冲池中，调节高压电源至18kV；

（3）毛细管电泳检测单个中性粒细胞中H₂O₂：调节高压电源至18kV，待基线平稳后，调节高压电源至5kV，进样H₂O₂标准样品10s，再将高压电源调回至18kV，运行实验并记录电泳图。