[发明专利]一种蛋白质定量分析方法

说明书

技术领域

本发明属于化学分析领域，尤其涉及一种蛋白质材料定量分析的方法，特别用于指导真丝、合成蛋白质纤维、羽绒等材料的低损伤加工工艺的优化与表征。

背景技术

目前的蛋白质成分的标准定量分析方法是基于N元素含量测试的凯氏定氮法，这种方法的最大问题是只认N元素，而不考虑其来源，这就给食品、材料等领域中的蛋白质分析带来很多的麻烦，乃至给不法分子提供了可乘之机，如在奶粉中添加含N量极高的三聚氰胺，造成了及其恶劣的社会问题。同时，丝绸、羊毛、羽绒等蛋白质纤维在染整加工、服用过程中，当经受不合适的酸碱、氧化剂等化学药剂，或使用中的紫外光照、热量等外在因素的影响，会造成蛋白质成分损失。中国专利号为CN200910172516.3公开了一种食品中蛋白质含量快速检测方法，根据样品中蛋白质与检测试剂起显色反应，反应产物在610nm处有最大吸收峰，通过比较不同浓度蛋白质标准样品的Abs₆₁₀(吸光度)值，制定标准曲线，进而计算待测物中蛋白质的含量，该检测方法具有检测方便、测量速度快且检测成本较低等优点，可以满足快速检测蛋白质的需要。但这种检测方法且需要配制较为复杂的溶液，十二烷基盐组合等多种助剂的加入将使溶液浑浊，直接影响测量吸光度值的准确性，且蛋白质材料中多糖类等其他非蛋白质成分可与染料形成基色，测量不能真实反映蛋白质吸光值，并且本方法测量对象较为局限。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种准确度高、实验简便易行的蛋白质材料中蛋白质定量分析的方法。

为了实现上述目的，本发明采取的技术方案为提供一种蛋白质定量分析方法，包括如下步骤：

(1)制备芳香胺类重氮盐；

(2)蛋白质材料与芳香胺类重氮盐进行重氮偶合；

(3)对上述重氮偶合产物进行光谱测试；

(4)根据光谱特征建立吸光度与酪氨酸含量的标准曲线；

(5)取待测样品经上述前三个步骤处理后得到其重氮偶合产物的吸光度；

(6)根据上述标准曲线的线性关系推导出其酪氨酸含量；

(7)根据待测样品的酪氨酸含量，推导出其蛋白质含量。

优选的，所述的蛋白质材料为丝素粉、丝素膜、酪素、羊毛粉、真丝、合成蛋白质纤维或羽绒材料。

优选的，所述的芳香胺类重氮盐为苯胺重氮盐、邻硝基苯胺重氮盐、间硝基苯胺重氮盐、对硝基苯胺重氮盐或者间苯二胺重氮盐。

优选的，所述的蛋白质材料为亲水性，将蛋白质材料与重氮盐进行浸染偶合工艺。

优选的，所述的蛋白质材料为疏水性，将蛋白质材料溶于有机溶剂后再与重氮盐进行浸染偶合工艺。

优选的，所述的吸光度采用分光光度计测试。

采用本发明的技术方案，不需要对蛋白质材料进行水解，消除了水解过程对蛋白质测试精确度的影响，同时本发明还可以消除含N元素色素或染料对材料蛋白质分析结果的影响，本方法简便易行、测量更准确、测试对象更广，通过对偶合反应温度和时间的控制，得到的重氮偶合产物较纯，便于后面光谱测量的进行。

对于蛋白质材料采取浸染偶和工艺使蛋白材料与重氮盐充分发生偶合反应。对于亲水性蛋白质材料，保证重氮盐稍过量；对于疏水性蛋白质材料，将材料溶于有机溶剂，便于偶合反应的充分进行。

本发明方法为蛋白质定量分析提供一种全新的思路，实验操作简便，具有重要的科学意义和实际应用的价值。

附图说明

图1是本发明酪氨酸残基重氮偶合反应机理图；

图2是本发明的偶合反应装置，其中：1-搅拌机，2-温度计，3-滴液漏斗，4-三口烧瓶，5-低温浴槽；

图3是本发明实施例偶合产物的光谱侧视图；

图4是本发明根据光谱特征建立的吸光度与酪氨酸含量的标准曲线。

具体实施方式

芳香族伯胺和亚硝酸作用生成重氮盐的反应称为重氮化。

Ar-NH₂+2HX+NaNO₂-→Ar-N₂X+NaX+2H₂O