[发明专利]一种抗IgA抗体检测试剂盒

权利要求书

1.一种抗IgA抗体检测试剂盒，由试剂和盒体构成，所述的试剂放置在盒体中，其特征在于，所述的试剂由样品稀释液、包被缓冲液、洗板液、封闭液、显色液、终止液、包被抗原、酶标二抗、抗IgA（+）标准品、阳性对照和阴性对照组成；所述的样品稀释液是磷酸盐缓冲液，磷酸盐缓冲液的浓度在0.08～0.12 mol/L之间，磷酸盐缓冲液中加入有聚氧乙烯山梨醇酐单月桂酸酯，所述的聚氧乙烯山梨醇酐单月桂酸酯在磷酸盐缓冲液中的重量百分比在0.04～0.06%之间；所述的包被缓冲液是碳酸盐缓冲液，碳酸盐缓冲液的浓度在 0.04～0.06 mol/L之间；所述的洗板液是磷酸盐缓冲液，磷酸盐缓冲液的浓度在0.08～0.12 mol/L之间，磷酸盐缓冲液中加入有聚氧乙烯山梨醇酐单月桂酸酯，所述的聚氧乙烯山梨醇酐单月桂酸酯在磷酸盐缓冲液中的重量百分比在0.04～0.06%之间；所述的封闭液是磷酸盐缓冲液，所述的磷酸盐缓冲液的浓度在0.08～0.12 mol/L之间，磷酸盐缓冲液中加入有聚氧乙烯山梨醇酐单月桂酸酯和牛血清白蛋白，所述的聚氧乙烯山梨醇酐单月桂酸酯在磷酸盐缓冲液中的重量百分比在0.04～0.06%之间，所述的牛血清白蛋白在磷酸盐缓冲液的重量百分比在0.1～1.0%之间；所述的显色液是磷酸酶底物缓冲液中，加入对硝基苯磷酸二钠，所述的对硝基苯磷酸二钠的浓度在0.5～2g/L之间；所述的终止液是氢氧化钠，所述的氢氧化钠的浓度在2～4mol/L之间；所述的包被抗原为定量人IgA，浓度为3-15mg/ml；所述的酶标二抗是磷酸酶标记兔抗人抗体；所述的阴性对照为抗IgA抗体阴性血清，所述的阳性对照为抗IgA抗体阳性血清。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的包被抗原，即IgA抗原标准品的制备方法包括以下步骤：

（1）将正常人血清rpm20000-30000，1-2h，4℃离心，并用0.01M-0.05M pH 7.2-PH7.4 PBS 稀释1-2倍后通过protein G亲和柱进行亲和层析；0.01M-0.05M pH 7.2-PH7.4 PBS 缓冲液平衡约5-10倍柱床体积，大部分IgG吸附于柱上；

（2）0.3ml-0.8ml/min 流速缓慢上样，收集穿过液，将其进行protein A亲和层析，0.01M-0.05M pH 7.2-PH7.4 PBS 缓冲液平衡约5-10倍柱床体积；恒流泵控制洗脱流速，缓慢0.1M-0.5M pH 2.0-PH4.0甘氨酸-盐酸缓冲液洗脱5-10倍柱床体积得到富含IgA的洗脱液；收集并用1-1/10体积的1M-2M pH 8.0-PH10.0 Tris-HCl 缓冲液中和；用0.01M-0.05M pH 7.2-PH7.4 PBS 缓冲液平衡5-10倍柱床体积再生；

（3）将洗脱液通过superdex 200凝胶过滤，分部收集，测定OD₂₈₀值选取峰值，即可除去杂质，得到纯化的IgA。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的样品稀释液和洗板液的pH值在7-7.4之间。