[发明专利]一株产喜树碱的喜树内生细菌-LY214及其用途

权利要求书

1.一种从珙桐科植物喜树中分离得到的内生细菌，其特征在于该内生细菌的分类命名为Paenibacillus polymyxa LY214，属多粘类芽孢杆菌，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC6841。

2.根据权利要求1所述的内生细菌，其特征在于，该内生细菌，其特征在于该内生细菌Paenibacillus polymyxa LY214的16S rDNA碱基序列1517bp，如SEQ ID NO.1所示。

3.权利要求1所述的一种从珙桐科植物喜树中分离得到内生细菌多粘类芽孢杆菌Paenibacillus polymyxa LY214的方法，其特征在于，该方法包括：

将喜树植物材料按照常规操作切段、清洗、消毒后接种到5%水琼脂固体培养基，28℃±2℃恒温培养2～3周，待植物材料长出菌丝，挑取菌丝移至沙氏琼脂固体培养基继续培养，最后经纯化后得到内生细菌多粘类芽孢杆菌Paenibacillus polymyxa LY214。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述喜树植物材料是喜树树根或树皮或果实或树叶或树枝。

5.根据权利要求1所述的多粘类芽孢杆菌Paenibacillus polymyxa LY214在制备喜树碱中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，利用珙桐科植物喜树内生细菌多粘类芽孢杆菌Paenibacillus polymyxa LY214获得喜树碱的方法包括多粘类芽孢杆菌Paenibacillus polymyxa LY214菌株发酵培养步骤和喜树碱粗提物步骤。

7.根据权利要求5或6所述的应用，其特征在于，所述方法中的发酵培养步骤中，将多粘类芽孢杆菌Paenibacillus polymyxa LY214菌株接种到沙氏琼脂液体培养基，摇床160±20rpm，28±2℃，发酵培养8～15d，得到发酵混合物；

在所述方法中的的喜树碱提取步骤中，将发酵混合物经4000rpm离心15min，过滤，分别收集滤液与菌丝体；所述滤液经V/V=4:1的氯仿-甲醇混合溶剂萃取，有机相于40℃减压浓缩至干得到发酵液提取物；所述菌丝体研磨破碎，甲醇浸泡过夜，等体积的V/V=4:1的氯仿-甲醇混合溶剂萃取，有机相40℃减压浓缩得到菌丝体提取物；发酵液提取物或菌丝体提取物加入V/V=4:1的氯仿-甲醇溶解，经针头过滤器过滤得到喜树碱粗提物。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，依照常规操作必要时可以在多粘类芽孢杆菌Paenibacillus polymyxa LY214菌株发酵培养步骤前有多粘类芽孢杆菌Paenibacillus polymyxa LY214菌株种子液制备步骤。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述的多粘类芽孢杆菌Paenibacillus polymyxa LY214菌株种子液制备步骤包括菌种活化与种子培养。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述的菌种活化中，活化培养基为沙氏固体培养基，28±2℃，培养时间5～7d；种子培养中，培养基为沙氏液体培养基，28±2℃，摇床160±20rpm培养2～3d。