[发明专利]一种用于BACE1抑制剂筛选的电化学方法

权利要求书

1.一种用于BACE1抑制剂筛选的电化学方法，其特征在于，把生物素标记的多肽分子组装在金电极的表面后，将金电极的表面封闭；用上述封闭了表面的金电极在待筛选的BACE1抑制剂和BACE1存在的条件下进行抑制酶切反应；再将巯基二茂铁修饰的纳米金/抗生物素蛋白复合物衍生到抑制酶切反应完成后得到的金电极的表面，并用衍生所得到的金电极通过电化学检测进行BACE1抑制剂的筛选。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述BACE1抑制剂的筛选是将至少3根组装了生物素标记的多肽分子并封闭了表面的金电极置于浓度为5～15nM的BACE1与不同浓度的待筛选的BACE1抑制剂的混合液中进行抑制酶切反应；在抑制酶切反应完成后所得到的金电极的表面衍生巯基二茂铁修饰的纳米金/抗生物素蛋白复合物，再进行电化学检测；通过电化学响应确定抑制效果和抑制剂浓度的关系，并用IC₅₀值来判定待筛选的BACE1抑制剂的抑制效果，进行BACE1抑制剂的筛选。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的抑制酶切反应的反应条件是在37℃的环境中反应30～90min。

4.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述巯基二茂铁修饰的纳米金/抗生物素蛋白复合物通过如下方法获得：将HS-(CH₂)₆Fc超声溶解在正己烷中,在上述溶液中加入PBS稀释的纳米金/抗生物素蛋白复合物，在800～1200rps的转速下摇动20～28h，离心弃去有机相和水相，即得。

5.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述的封闭是将组装了生物素标记的多肽分子的金电极先用0.1mM的HT浸泡4～10min，再用1%的BSA浸泡0.5～1.5h。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的生物素标记的多肽分子易溶于水。

7.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述的电化学检测是将组装好的金电极置于0.1～0.5M KClO₄的水溶液中进行。