[发明专利]一种莱克多巴胺抗体免疫亲和层析柱及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种莱克多巴胺抗体免疫亲和层析柱及其应用。

背景技术

莱克多巴胺是一种医药原料，具有广泛的生理效应，可用治疗充血性心力衰竭症的强心药，且常用于支气管哮喘、支气管痉挛和产科疾病的治疗。当其用量增加到临床用量的5-10倍时，可增加肌肉生长，减少脂肪蓄积，是良好的营养分配剂和生长促进剂。美国FDA在2000年批准，可以用于动物营养重新配剂，广泛地用于畜牧业和养殖业。可以同时提高动物的日增重，提高饲料利用率，提高动物的蛋白质含量。但是其在动物体内的残留一旦经食物链进入人体，会对食用者产生巨大危害，特别对心脏病、糖尿病、高血压、甲亢、青光眼、前列腺肥大等病人危害更大，甚至死亡，如瘦肉精（莱克多巴胺是“瘦肉精药物”中的一种）在上海曾经引发几百人的中毒事件；在台湾由于从美国进口的猪肉里含有瘦肉精，几乎挑起一场政治争端。目前我国禁止将β-激动剂等药物动物促生长剂使用。但长期以来，各种因非法使用β-激动剂而造成的中毒事件时有发生。为打击非法用药，保护消费者的健康与安全，迫切需要健全相关的检测方法。

目前，兽药残留检测常用的方法有气相色谱、高效液相色谱以及气质联用等理化分析方法。虽然这些方法特异性强、灵敏度高，但是样品前处理操作步骤繁琐，成本较高，也不适用于大批量样品的筛选检测。免疫化学分析鉴于在抗原抗体的定性定量方面独特的优势和操作简便快速、成本低、灵敏度较高、分析样本量大的优点弥补了理化分析的不足，在莱克多巴胺的残留检测中起着越来越重要的作用，而抗血清或腹水的成分非常复杂，一些杂蛋白可能会影响抗体与抗原的反应，因此莱克多巴胺抗体的纯化就显得尤为重要。

目前抗体纯化方法主要是盐析法、有机溶剂沉淀法、各种原理的层析法以及亲和纯化法（通常是Protein A或Protein G）等，这些都不能得到很纯的特异性抗体，即使是亲和纯化法，也只能得到特异性抗体和非特异性抗体的混合物，而不能将两者分离而得到特异性的抗体。因此研究一种能够有效分离纯化特异性抗体的纯化方法，具有较高的学术价值和应用前景。

发明内容

本发明的一个目的是提供了一种莱克多巴胺抗体免疫亲和吸附剂。

本发明所提供的莱克多巴胺抗体的免疫亲和吸附剂，是由莱克多巴胺半抗原与固相载体交联而成；所述莱克多巴胺半抗原的结构如式I所示；所述固相载体为琼脂糖凝胶、纤维素、葡聚糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶、多孔玻璃或聚丙烯酰胺-琼脂糖凝胶。

式I

在本发明中，所述固相载体具体为Sepharose4B。更加具体的，在本发明的一个实施例中，所述Sepharose4B为GE公司产品，货号为17-5437-01。

所述莱克多巴胺半抗原具体可按照包括如下步骤的方法制备：将莱克多巴胺、N-(4-溴丁基)邻苯二甲酰亚胺、水合肼按照摩尔比为1：1：5的比例进行反应，获得所述莱克多巴胺半抗原（氨基活化）。

在本发明的一个实施例中，所述免疫亲和吸附剂的制备方法包括如下步骤：将所述莱克多巴胺半抗原与溴化氰活化的Sepharose4B固相载体交联，并进行封闭处理，获得所述免疫亲和吸附剂。所述交联具体为在将所述莱克多巴胺半抗原与所述溴化氰活化的Sepharose4B在0.1M pH8.0的碳酸氢钠溶液（称取0.84g碳酸氢钠，溶于100ml去离子水）中室温（20-25℃）反应4h，所述莱克多巴胺半抗原、所述溴化氰活化的Sepharose4B和所述0.1M pH8.0的碳酸氢钠溶液（称取0.84g碳酸氢钠，溶于100ml去离子水）的配比具体可为4mg：1ml：2ml；所述封闭处理具体为用1MpH8.0的乙醇胺水溶液（量取5.98ml乙醇胺，溶于80ml去离子水中，用0.1M HCl调节pH至8.0）于室温（20-25℃）下封闭2h。在上述方法中，在所述交联后，还包括以0.1M pH8.0的碳酸氢钠溶液（称取0.84g碳酸氢钠，溶于100ml去离子水）洗涤填料去除未结合的所述莱克多巴胺半抗原的步骤。

本发明的再一个目的是提供一种莱克多巴胺抗体的免疫亲和层析柱。

本发明所提供的莱克多巴胺抗体的免疫亲和层析柱，以所述免疫亲和吸附剂为填料。

在本发明的一个实施例中，所述免疫亲和层析柱的制备方法包括如下步骤：将所述免疫亲和吸附剂装入层析柱，用醋酸缓冲液（0.1M pH4.0，含有0.5M NaCl）和Tris-HCl缓冲液（0.1M pH8.0，含有0.5M NaCl）交替洗涤填料三次（完成一次交替洗涤为一次），得到所述免疫亲和层析柱。