[发明专利]一种基于胶乳的三聚氰胺快速检测方法及试剂盒

权利要求书

1.一种包被三聚氰胺抗体的胶乳微球溶液的制备方法，其包括：

1)将表面带有羧基的胶乳微球稀释在活化缓冲液中，其中，所述活化缓冲液为包含0.5～1g/L吐温20的10～40mM磷酸盐缓冲液，pH7.4-7.8；

2)加入活化剂，混合反应，其中所述活化剂为碳化二亚胺；

3)加入三聚氰胺单克隆抗体，进行包被反应；

4)加入淬灭液终止反应；和

5)加入封闭液以封闭游离的羧基，从而获得包被三聚氰胺抗体的胶乳微球溶液。

2.如权利要求1所述的方法，其中，使用一步EDC活化法活化所述胶乳微球表面的羧基。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中，所述活化缓冲液为包含0.7g/L吐温20的10mM磷酸盐缓冲液，pH7.4。

4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述胶乳微球为粒径为100-200nm，羧基含量为100-200μeq/g的聚苯乙烯胶乳微球。

5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述方法还包括以下步骤：

6)将步骤5获得的胶乳微球溶液离心去除上清，使用复溶液清洗，其中所述复溶液包含8-15g/L甘氨酸、0.5-1.5g/L叠氮钠、8-13g/L山梨醇、3-8g/L牛血清白蛋白和1.5-2.5g/L EDTA·Na2，pH7.8-8.2；

7)重复步骤6)三次，随后将溶于所述复溶液的胶乳溶液在2-8°C下低温保存。

6.如权利要求5所述的方法，其中，所述复溶液包含11.26g/L甘氨酸、1.0g/L叠氮钠、10.0g/L山梨醇、5.0g/L牛血清白蛋白和2.0g/L EDTA·Na2，pH8.0。

7.通过权利要求1-6中任一项所述方法制备的包被三聚氰胺抗体的胶乳微球溶液。

8.用于检测样品中三聚氰胺的试剂盒，其包含：

1)R1试剂：包含PEG6000和吐温20的磷酸盐缓冲液，pH7.0-7.6；

2)R2试剂：权利要求7所述的包被三聚氰胺抗体的胶乳微球溶液；和

3)三聚氰胺标准品。

9.一种用于检测样品中三聚氰胺浓度的方法，其包括以下步骤：

1)将所述样品与包含PEG6000和吐温20的磷酸盐缓冲液(pH7.0-7.6)，混合温育；

2)加入权利要求7所述的包被三聚氰胺抗体的胶乳微球溶液；

3)测量所得混合物在加入所述胶乳微球溶液后10s至5分钟之间任意两个时间点的吸光度差值ΔA540；和

4)根据使用三聚氰胺标准品绘制的标准曲线确定样品中的三聚氰胺浓度。

10.如权利要求9所述的方法，其中所述样品选自鲜奶、奶粉、奶酪、奶油和酸奶。