[发明专利]提高丁二酸产量的重组菌及构建方法

权利要求书

1.重组菌，为提高大肠杆菌或其突变株中磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶PPC和磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶PCK酶活，得到的重组菌。

2.根据权利要求1所述的重组菌，其特征在于：所述提高大肠杆菌或其突变株中PPC和PCK酶活的方法如下：

将所述大肠杆菌或其突变株中的磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶PPC基因的调控元件替换为如下A组调控元件中的任意一种，且将所述大肠杆菌或其突变株中磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶PCK基因的调控元件替换为如下A组调控元件和B组调控元件中的任意一种：

所述A组调控元件由人工调控元件M1-12、M1-30、M1-46、M1-37和M1-93组成；

所述B组调控元件由人工调控元件Ppck*、RBSL-1、RBSL-2和RBSL-3组成；

所述人工调控元件M1-12的核苷酸序列为序列表中的序列4；

所述人工调控元件M1-30的核苷酸序列为序列表中的序列5；

所述人工调控元件M1-46的核苷酸序列为序列表中的序列6；

所述人工调控元件M1-37的核苷酸序列为序列表中的序列7；

所述人工调控元件M1-93的核苷酸序列为序列表中的序列8；

所述人工调控元件Ppck*的核苷酸序列为序列表中的序列2；

所述人工调控元RBSL-1的核苷酸序列为序列表中的序列11；

所述人工调控元RBSL-2的核苷酸序列为序列表中的序列12；

所述人工调控元RBSL-3的核苷酸序列为序列表中的序列13；

所述磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶PCK基因调控元件的核苷酸序列为序列表中的序列3；

所述磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶PPC基因调控元件的核苷酸序列为序列表中的序列9。

3.根据权利要求1或2所述的重组菌，其特征在于：

所述提高大肠杆菌中磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶PPC和磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶PCK酶活的方法为将所述大肠杆菌中的磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶PPC基因的调控元件替换为所述人工调控元件M1-46，且将所述大肠杆菌中磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶PCK基因的调控元件替换为所述人工调控元件RBSL-2。

4.根据权利要求1或2所述的重组菌，其特征在于：

所述提高大肠杆菌突变株中磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶PPC和磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶PCK酶活的方法为如下1）-8）中任意一种：

1）将所述大肠杆菌突变株中的磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶PPC基因的调控元件替换为所述人工调控元件M1-46，且将所述大肠杆菌突变株中磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶PCK基因的调控元件替换为所述人工调控元件Ppck*；

2）将所述大肠杆菌突变株中的磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶PPC基因的调控元件替换为所述人工调控元件M1-12，且将所述大肠杆菌突变株中磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶PCK基因的调控元件替换为所述人工调控元件Ppck*；

3）将所述大肠杆菌突变株中的磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶PPC基因的调控元件替换为所述人工调控元件M1-37，且将所述大肠杆菌突变株中磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶PCK基因的调控元件替换为所述人工调控元件Ppck*；

4）将所述大肠杆菌突变株中的磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶PPC基因的调控元件替换为所述人工调控元件M1-93，且将所述大肠杆菌突变株中磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶PCK基因的调控元件替换为所述人工调控元件Ppck*；

5）将所述大肠杆菌突变株中的磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶PPC基因的调控元件替换为所述人工调控元件M1-12，且将所述大肠杆菌突变株中磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶PCK基因的调控元件替换为所述人工调控元件M1-37；

6）将所述大肠杆菌突变株中的磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶PPC基因的调控元件替换为所述人工调控元件M1-46，且将所述大肠杆菌突变株中磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶PCK基因的调控元件替换为所述人工调控元件M1-37；

7）将所述大肠杆菌突变株中的磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶PPC基因的调控元件替换为所述人工调控元件M1-37，且将所述大肠杆菌突变株中磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶PCK基因的调控元件替换为所述人工调控元件M1-37；

8）将所述大肠杆菌突变株中的磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶PPC基因的调控元件替换为所述人工调控元件M1-93，且将所述大肠杆菌突变株中磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶PCK基因的调控元件替换为所述人工调控元件M1-37。