[发明专利]一种从光帽鳞伞中提取的抗肿瘤蛋白及其制备方法

权利要求书

1.一种光帽鳞伞（Pholiota nameko）中提取的抗肿瘤蛋白PNAP，所述的抗肿瘤蛋白PNAP来自光帽鳞伞（Pholiota nameko），分子量为17KDa，N-端氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示序列Ala Gly Arg Thr Phe Ile Gly Tyr Asn Gly。

2.权利要求1所述的抗肿瘤蛋白的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）将光帽鳞伞（Pholiota nameko）子实体研磨成粉，溶解于0.2~0.5M的NaCl溶液中，2~6℃浸提8~16小时，5000~8000rpm离心20~40min，收集上清液，即光帽鳞伞（Pholiota nameko）子实体粗提液；

（2）向步骤（1）中的光帽鳞伞（Pholiota nameko）子实体粗提液中加入硫酸铵至饱和度为70~100%，2~6℃放置8~16小时，10000~20000rpm离心10~40min，收集沉淀，即光帽鳞伞（Pholiota nameko）蛋白粗提物；

（3）将步骤（2）中的光帽鳞伞（Pholiota nameko）蛋白粗提物用20~50mM、pH6.0~9.0的PBS缓冲液溶解，然后在2~6℃、1~5倍重量的蒸馏水中透析8~16小时，反复3~5次，透析后进行冷冻干燥，即光帽鳞伞（Pholiota nameko）蛋白粗粉；

（4）将步骤（3）中的光帽鳞伞（Pholiota nameko）蛋白粗粉溶解于25~50mM MES、pH5.0~6.0的MES A缓冲液中，上样离子交换层析柱，用25~50mM MES、0.5～1M NaCl、pH5.0~6.0的MES B缓冲液梯度洗脱，收集洗脱峰；

（5）将洗脱峰上样凝胶层析柱，用25~50mM MES、200~500mM NaCl，pH5.0~6.0的MES C缓冲液洗脱，获得光帽鳞伞（Pholiota nameko）抗肿瘤蛋白。

3.权利要求1所述的光帽鳞伞（Pholiota nameko）抗肿瘤蛋白在对人乳腺癌细胞株MCF7的生长抑制中的应用。/

4.根据权利要求3所述的应用，光帽鳞伞（Pholiota nameko）抗肿瘤蛋白对人乳腺癌细胞株MCF7的生长具有明显的抑制作用，JC-1染色分析线粒体膜电位证明该蛋白能够诱导肿瘤细胞凋亡。