[发明专利]一种去氢甲睾酮残留快速检测试纸卡及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于免疫化学检测技术领域，具体涉及一种去氢甲睾酮残留快速检测试纸卡及其制备方法。

背景技术

去氢甲睾酮（1-dehydro-17a-methyltestosterone，DMT），又名大力补、美雄酮，是一种人工合成的促蛋白同化类固醇激素。DMT能促进蛋白质合成、维持正氮平衡、增进食欲、促进钙磷在骨组织中沉积和新生组织的形成，因而在医学临床上常用于治疗再生障碍性贫血、男性发育迟缓、骨折及烧伤处理、手术后慢性消耗性疾病、老年骨质疏松和肿瘤恶液汁病等。DMT还具有促进动物体内营养物质沉积和改善生产性能的作用，在畜牧业生产中被用作饲料添加剂，以促进动物生长，提高瘦肉率。运动员服用DMT后能增强肌肉力量和体力，提高比赛成绩，因而也被违法应用到运动会和动物竞技比赛中。

但DMT是一种蛋白同化激素，长期或大量服用会对人体有很多副作用，导致肝功能障碍、生殖功能紊乱，增加患心血管疾病的风险等。蛋白同化激素用作饲料添加剂时，会在动物体内残留。当人们长期食用含有该药物残留的动物性食品时，同样会造成人类生殖系统障碍、发育异常，提高乳房癌、睾丸癌等发病机率，严重危害人类健康。因此，欧盟自1986年以来就禁止在肉食性动物生产中以促进生长为目的使用人工合成的促蛋白同化激素。我国农业部2002年4月发布的《食品动物禁用的兽药及其它化合物清单》中也明确规定性激素类原料药及其单方、复方制剂产品不准以抗应激、提高饲料报酬、促进动物生长为目的在饲养过程中使用。

这就要求对食源性动物进行严格的激素滥用监控，以保护消费者的合法权益。DMT残留常用的检测方法有高效液相色谱法（HPLC），气相色谱－质谱法（GC-MS）和液相色谱－质谱法（LC-MS）等。这些方法灵敏度高，定性准确，可以确定化合物的分子量、分子式，甚至官能团，适合定量检测DMT含量。但这些方法成本高，需要专业的技术人员，昂贵的实验仪器及长时间的前期准备工作。而免疫学检测方法建立在抗体对抗原的分子识别上，其主要优点是抗原抗体的亲合力高、检测快速、经济实用，能够实现对生物液体的小体积、大通量检测，是最灵敏的方法之一。

胶体金标记免疫分析法是近年来迅速发展的一种新型分析技术，其特点是简便快速、成本低、无污染、无需培训，非常适合于现场检测。与ELISA相比，具有样品前处理简单，显色时间短（3-5 min），且所有试剂包含在一根试纸条上，无需使用仪器等优点，具有广阔的市场前景和应用价值。因此，研制快速、灵敏、高效的去氢甲睾酮残留快速检测试纸卡对于保障动物性食品安全具有十分重要的意义。本项目也得到2012年度国家自然科学基金项目 （U1204310）资金支持。

发明内容

本发明解决的技术问题是提供了一种操作简便、快速准确、灵敏度高、特异性强、成低低廉、稳定性好且可进行批量检测的去氢甲睾酮残留快速检测试纸卡。

本发明解决的另一个技术问题是提供了一种去氢甲睾酮残留快速检测试纸卡的制备方法。

本发明的技术方案是：一种去氢甲睾酮残留快速检测试纸卡，其特征在于：所述的去氢甲睾酮残留快速检测试纸卡包括塑料盒体和封装于塑料盒体内的试纸条，所述试纸条的底层为支撑层，该支撑层上由左到右依次附着有紧密相连的样品垫、金标抗体结合垫、硝酸纤维素膜和吸收垫，所述的塑料盒体上开有加样孔和观察窗，该加样孔的位置与试纸条上的样品垫位置相对应，观察窗与试纸条上的硝酸纤维素膜位置相对应，所述的硝酸纤维素膜上有去氢甲睾酮－鸡卵清白蛋白偶联物溶液印制的检测线和羊抗鼠IgG溶液印制的质控线，所述的金标抗体结合垫上灌注有胶体金标记的抗去氢甲睾酮特异性单克隆抗体。

本发明所述的支撑层为PVC板。本发明所述的吸收垫是以植物长纤维为原材料制成的纯白滤纸。本发明所述的样品垫和金标抗体结合垫是由玻璃纤维棉制作而成的。本发明所述的样品垫和金标抗体结合垫的叠压宽度为2 mm，吸收垫与硝酸纤维素膜的叠压宽度为2 mm。本发明所述的样品垫、金标抗体结合垫和吸收垫上方覆盖有胶膜保护层。本发明所述的硝酸纤维素膜两端分界处有标记线。

本发明所述的胶体金标记的抗去氢甲睾酮特异性单克隆抗体是由去氢甲睾酮－牛血清白蛋白偶联物免疫Balb/C小鼠制备而来的。