[发明专利]一种应用miR-487a逆转乳腺癌耐药的方法

说明书

技术领域：

本发明提供一种治疗肿瘤药物领域，特别涉及一种miR-487a在逆转乳腺癌细胞耐药中的应用。

背景技术：

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，严重影响着妇女的身心健康甚至危及生命。化疗是乳腺癌治疗的常用方法，但化疗过程中出现的耐药问题严重影响了临床疗效和患者预后。与乳腺癌耐药作用密切相关的乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistant protein,BCRP)是从耐药的人乳腺癌细胞株MCF7/AdrVP中用mRNA指纹分析法分离出来的跨膜半转运蛋白。其基因定位于人染色体4q22，由ABCG2基因编码，2.4kb mRNA翻译的655个氨基酸残基构成，含有一个ATP结合域和一个疏水性跨膜结构域，是继多药耐药相关蛋白(MRP)、P糖蛋白(P-gp)和肺耐药蛋白(LRP)之后，肿瘤多药耐药机制研究中的又一热点蛋白。BCRP通过水解ATP供能将转运底物（化疗药物）从细胞内逆浓度梯度泵到细胞外，使乳腺癌细胞内米托蒽醌（MX）、拓扑替康等浓度下降，从而导致细胞对药物抵抗、诱导耐药性产生。

近年来微小RNA(microRNA，miRNA)在逆转耐药中的作用受到相关学者的关注。miRNA是长度约22nt的内源性单链的非蛋白编码RNA，在个体发育、细胞分化、增殖、凋亡等生理活动中以及在肿瘤发生、发展等病理过程中起重要调控作用。miRNA一般通过与目标mRNA分子的3’端非编码区域（3’UTR）特异结合调节基因的表达。由于BCRPmRNA-3’UTR长度约为2kb(Genebank:accession no.NM_004827;UTR数据库:UTR database entry UTR:3HSA117529)，远长于人类mRNAs-3’UTR的平均长度700bp，因此，提示BCRPmRNA-3’UTR可能存在miRNA调控BCRP表达的作用靶点。

一些研究证实某些miRNAs可通过作用于BCRPmRNA-3’UTR调节BCRP的表达。Wang等在胰腺癌细胞的研究发现miR-520h能够下调BCRP的蛋白表达水平；To KK等在结肠癌细胞的研究结果也证实了这一点：miR-519c具有降低SI结肠癌细胞内源性BCRP转录及蛋白表达作用；Pan等研究发现在耐药的乳腺癌细胞MCF-7/MX100中转染miR-328或miR-519c后BCRP的蛋白表达水平明显下降。可见miRNA对靶向调控BCRP参与乳腺癌耐药起到了关键的作用。

本发明中我们应用生物学信息分析可得到，BCRPmRNA-3’UTR存在miR-487a调控BCRP表达的作用靶点，但是miR-487a是否对BCRP的表达进行调节以及由此而逆转乳腺癌细胞的耐药目前尚不清楚。因此，本发明在乳腺癌药物敏感细胞MCF-7（BCRP低表达）和耐药细胞MCF-7/MX（BCRP高表达）中，分别转染miR-487a inhibitor和miR-487a mimic，构建miR-487a沉默表达和过表达的乳腺癌细胞模型，及对裸鼠进行MCF-7/MX细胞皮下注射，构建在体移植瘤模型，MX处理上述模型后，观察细胞及小鼠对MX的敏感性、BCRP的表达及细胞内MX含量变化，探讨离体和在体水平时miRNA-487a对乳腺癌细胞耐药性的影响及可能机制。

发明内容：

本发明所要解决的技术问题是提供一种应用miR-487a逆转乳腺癌细胞耐药的方法。

本发明是通过以下技术方案来实现的：

一种应用miR-487a逆转乳腺癌耐药的方法，所述方法包括：

（1）利用miR-487a的模拟物miR-487a mimic，抑制乳腺癌耐药细胞MCF-7/MX中的BCRP表达与药物转运功能，增加对BCRP转运底物盐酸米托蒽醌MX的敏感性；

（2）利用miR-487a的模拟物miR-487a agmir脂质体，靶向抑制MCF-7/MX诱导的乳腺癌裸鼠移植瘤内BCRP的表达，增加在体瘤细胞对MX的药物敏感性；

（3）利用miR-487a的抑制剂miR-487a inhibitor上调药物敏感细胞MCF-7的BCRP表达和药物转运功能，增加对MX的耐药性。

步骤（1）中miR-487a模拟物miR-487a mimic为包含miR-487a核酸序列“茎-环”结构的发夹状结构，主要序列如下：5’-UUGACCUACAGGGACAUACUAA-3’。步骤（1）中所述肿瘤细胞为乳腺癌耐药细胞MCF-7/MX。乳腺癌耐药细胞MCF-7/MX为过表达BCRP乳腺癌细胞。