[发明专利]猪圆环病毒Ⅱ型基因工程亚单位疫苗及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物制药技术领域，具体而言，涉及一种猪圆环病毒II型基因工程亚单位疫苗的制备方法和应用。 

背景技术

1991年加拿大John Harding报道了断奶仔猪多系统衰竭综合征(postweaning multisystemic wasting syndrome，PMWS)，后经研究证实猪圆环病毒II型(Porcine circovirus 2，PCV2)是该综合征的主要病原。 

现有研究表明，猪圆环病毒病(Porcine circovirus disease，PCVD)是由PCV2感染而引起的一种临床综合征，其主要症状表现为渐进性消瘦、呼吸困难急促、贫血、腹泻、黄疸、间质性肺炎、淋巴结炎及肾炎等。猪圆环病毒II型主要侵害5-12周龄断奶仔猪，而且与近年来发生的PMWS、猪皮炎与肾炎综合症(porcine dermatitis and nephropathy syndrome，PDNS)、猪呼吸道综合征(porcine respiratory disease complex，PRDC)、A2型先天性振颤(congenital tremor，CT)、猪增生性和坏死性肺炎(Porcine Proliferative and necrotizing Pneumonia，PNP)、繁殖障碍(Reproductive failure)等疾病都有密切关系。PCV2的危害在于能够使感染猪只的免疫功能受到损害，导致机体抵抗力下降，经常以亚临床感染的形式出现，易被忽视。由于PCV2感染使免疫系统受到损害，容易继发或并发其它感染性疾病，造成更大危害。本病呈世界流行，从2000年我国首次发现存在此病以来，已给我国养猪业造成了相当大的经济损失。 

猪圆环病毒(porcine circovirus，PCV)在分类学上属圆环病毒科、圆环病毒属，是已知的最小的动物病毒之一。病毒粒子直径约17nm，呈20面体对称结构，无囊膜。PCV具有两个基因型，即：PCV1、PCV2，基因组大小约为1.76kb，含有2个主要阅读框架，其中ORF1基因产物与病毒复制酶(Rep)相关，ORF2基因产物是构成病毒衣壳蛋白(Capsid protein，简称：cap)的成分。PCV1是由Tischer等1974年首次在PK15细胞培养物中发现，对猪无致病性。PCV2是于1991年首次在加拿大猪群中发现。1998年证实该病毒具有感染性和致病性，是养猪业需要防治的病毒类型。但由于PCV2在体外培养时不产生细胞病变，病毒增殖能力差，采用传统的方法制备该病毒疫苗非常困难。 

用基因工程的方法制备猪圆环病毒II型(PCV2)疫苗是控制该病的重要途径。尽管目前市场上已有杆状病毒表达的PCV2基因工程亚单位疫苗的供应，但人们仍在寻求新的低成本的PCV2疫苗的制备方法。 

发明内容

本发明旨在提供一种猪圆环病毒II型基因工程亚单位疫苗、及其制备方法和应用，以提 供一种新的猪圆环病毒II型亚单位疫苗及其制备方法和应用。 

为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种可溶性融合蛋白。该可溶性融合蛋白包括由大肠杆菌表达猪圆环病毒II型衣壳蛋白基因得到的蛋白，猪圆环病毒II型衣壳蛋白基因经过定位信号区域剪切和定点突变，定点突变包括将密码子AGA或AGG突变为CGC。 

进一步地，定点突变的部位包括位于猪圆环病毒II型衣壳蛋白的如下至少一组氨基酸残基位点：1)第97和第99位；2)第116位；3)第180位；4)第186位；5)第222位。 

进一步地，定点突变的部位包括位于猪圆环病毒II型衣壳蛋白的如下氨基酸残基位点：6)第97，99，116位；或7)第97，99，180，186位。 

进一步地，定位信号区域剪切包括猪圆环病毒II型衣壳蛋白基因5’端剪切掉39～159bp的DNA链；优选地，69～123bp；优选地，105bp。 

根据本发明的另一个方面，提供上述可溶性融合蛋白在制备猪圆环病毒II型疫苗中的应用。 

根据本发明的再一个方面，提供编码上述可溶性融合蛋白的DNA序列。 

根据本发明的又一个方面，提供一种载体。该载体包含上述编码可溶性融合蛋白DNA序列。 

根据本发明的又一个方面，提供一种宿主细胞。该宿主细胞包含上述载体。