[发明专利]制造人抗凝血酶-III制品的方法

权利要求书

1. 制造人抗凝血酶-III制品的方法，其特征是一种从Cohn低温乙醇法分离血浆蛋白工艺组分Ⅳ沉淀中分离纯化人抗凝血酶-Ⅲ（AT-Ⅲ）的工艺，具体实施过程如下步骤：

（1）、组分Ⅳ沉淀的抽提与处理

抽提缓冲液（氯化钠-柠檬酸钠溶液）与组分Ⅳ沉淀的混合比例为12:1～3:1  m/v；抽提温度为4～36℃；抽提pH为5.5～11，抽提时间为1～2小时；然后在4～20℃温度下，用气动隔膜泵将抽提混合液进行压滤，去除不溶物；将压滤滤出液pH值调至7.2左右，采用10kD超滤膜进行超滤浓缩；

（2）、S/D病毒灭活

按组分Ⅳ沉淀的抽提与处理步骤最终所得液体体积的10%，加入11% S/D病毒灭活液，在24～25℃搅拌6小时，其中的11%S/D病毒灭活液，用含吐温-80和磷酸三丁酯TNBP，按每110g吐温-80和33g TNBP加水至1千克的方法配制；

（3）亲和层析

以肝素亲和胶为吸附纯化载体，经过平衡、上样、洗涤、洗脱等步骤得到AT-Ⅲ原液，其中层析温度范围为4～36℃，各步骤液体流速为每小时6～9个柱体积；

①平衡：用平衡液对肝素亲和胶进行平衡，平衡液体积不少于4个柱体积；

②上样：将S/D病毒灭活步骤最终所得液体泵入层析柱中，通过肝素亲和胶进行吸附；

③洗涤：用洗涤液对亲和胶进行洗涤，洗涤液体积不少于8个柱体积，观察在线紫外吸收图谱，至图谱趋于水平时停止洗涤；

④洗脱：对肝素亲和胶进行洗脱，观察在线紫外吸收图谱，并用洁净的容器收集吸收峰处的流出液，即为AT-Ⅲ原液；

（4）、超滤

对亲和层析步骤中所得AT-Ⅲ原液用10kD孔径超滤膜超滤，添加必要的冷冻干燥保护剂，本冷冻干燥保护剂是指甘氨酸，其最终浓度为0.6～1.6%；

（5）、除菌过滤

（6）、分装

（7）、冷冻干燥

①分装后的制品常温入柜： 

②将隔板温度在40分钟内降至-40℃，保持3小时；

③开启真空泵，真空度控制在7～15Pa；

④2小时后将隔板温度升至-30℃，保持3小时；

⑤4小时后隔板温度升至-20℃，保持6小时；

⑥8小时后将隔板温度升至0℃，保持20小时；

⑦10小时后将温度升至30℃，保持6小时；真空度控制在5Pa以下保持1小时；

⑧真空压塞出柜： 

（8）、干热病毒灭活

干热温度100℃，时间为30min～60min。