[发明专利]靶向亲合体重组蛋白的构建及其表达和纯化方法

权利要求书

1.用于表达和纯化重组靶向亲合体Cys-Z_HER2:342-6His的核苷酸序列为：

GGATCCGACGATGACGACAAATGCGTTGATAACAAGTTTAACAAAGAAATGCGCAACGCGTACTGGGAAATCGCACTGCTGCCGAACCTGAACAACCAGCAGAAACGTGCCTTCATTCGTTCCCTGTATGATGACCCTAGCCAATCTGCTAACCTGCTGGCAGAGGCGAAAAAACTGAATGATGCTCAGGCGCCAAAACATCACCATCACCATCATTAATAGCTCGAG记为SEQ:ID:NO.1；

其中，中间下划线部分为亲合体Z_HER2:342的编码序列。

2.用于表达和纯化重组靶向亲合体Cys-Z_EGFR：1907-6His的核苷酸序列为：

GGATCCGATGACGATGACAAGTGCGTGGATAACAAATTCAACAAAGAGATGTGGGCGGCATGGGAAGAAATCCGTAACCTGCCAAACCTGAATGGTTGGCAGATGACCGCCTTTATTGCGAGCCTGGTTGATGACCCTTCTCAGTCCGCTAACCTGCTGGCTGAAGCGAAAAAACTGAACGACGCACAAGCTCCGAAACATCACCATCACCATCATTAATAGCTCGAG记为SEQ:ID:NO.2；

其中，中间下划线部分为亲合体Z_EGFR：1907的编码序列。

3.用于表达和纯化靶向亲合体重组蛋白的核苷酸序列，其特征在于其顺序依次为：BamH I酶切位点、肠激酶酶切位点编码序列、半胱氨酸密码子、亲合体编码序列、6His-Tag序列、终止密码子和Xho I酶切位点。

4.用于表达和纯化靶向亲合体重组蛋白的构建方法，其特征在于包括以下步骤：

1）在亲合体编码序列的基础上设计重组蛋白的核苷酸编码序列：序列前端依次加入BamH I酶切位点、肠激酶酶切位点编码序列和半胱氨酸密码子，序列中间为亲合体编码序列，序列后端依次加入6His-Tag纯化标签序列、终止密码子和Xho I酶切位点；

2）对重组编码序列中的所有密码子按照表达宿主的密码子偏好性进行碱基优化；

3）碱基优化后的重组基因片段由人工合成获得，再将重组片段进行BamH I、Xho I双酶切，酶切产物纯化后通过连接酶连接到表达质粒上，构建重组表达质粒。

5.靶向亲合体重组蛋白的表达和纯化方法，其特征在于包括以下步骤：

1）将已构建的重组质粒转化到密码子偏好对应的宿主中，加入诱导剂诱导重组亲合体的表达，验证重组蛋白是否表达；

2）收集全部表达产物，经镍柱亲和层析初步纯化得到融合蛋白，用肠激酶酶切融合蛋白，再用凝胶柱层析进一步分离纯化，最后得到高纯度的重组亲合体。

6.如权利要求5所述靶向亲合体重组蛋白的表达和纯化方法，其特征在于在步骤1）中，所述转化的方法采用电转化方法。

7.如权利要求5所述靶向亲合体重组蛋白的表达和纯化方法，其特征在于在步骤1）中，所述验证的方法是通过蛋白质电泳方法。

8.如权利要求5所述靶向亲合体重组蛋白的表达和纯化方法，其特征在于在步骤1）中，所述诱导剂采用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷。