[发明专利]一种百草妇炎清栓指纹图谱的建立方法

权利要求书

1.一种百草妇炎清栓指纹图谱的建立方法，其特征在于，方法如下：

(1)对照品溶液的制备：称取苦参碱2～10mg、槐果碱2～10mg，置于5-20ml量瓶中，加入甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得苦参碱、槐果碱的混合对照品溶液；

(2)供试品溶液的制备：称取百草妇炎清栓样品2～10g，置水浴上使熔化，加0.15-0.6ml氨水，加硅藻土5-20g，研匀，加氯仿25-100ml，超声15-60min，补重，过滤，取滤液10-40ml，蒸干，残渣用甲醇溶解并定容至5-20ml，过0.2-0.8μm微孔滤膜，作为供试品溶液；

(3)百草妇炎清栓指纹图谱的测定：吸取供试品溶液、对照品溶液各10～30μL，分别注入液相色谱仪，按照高效液相色谱法测定，得到色谱图；

其中色谱条件为：色谱柱：250mm×4.6mm，5μm的Comatex C18-AA柱；流动相：乙腈(A)-用磷酸调节pH为6-7的0.02-0.08％的三乙胺缓冲液(B)；梯度洗脱：0→100min，A的体积百分比10％→60％，流速0.5-2ml/min，检测波长：210～230nm，柱温：20～40℃，进样量：10～30μL。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，方法如下：

(1)对照品溶液的制备：称取苦参碱2～10mg、槐果碱2～10mg，置于10ml量瓶中，加入甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得苦参碱、槐果碱的混合对照品溶液；

(2)供试品溶液的制备：称取百草妇炎清栓样品2～10g，置水浴上使熔化，加0.3ml氨水，加硅藻土10g，研匀，加氯仿50ml，超声30min，补重，过滤，取滤液20ml，蒸干，残渣用甲醇溶解并定容至10ml，过0.45μm微孔滤膜，作为供试品；

(3)百草妇炎清栓指纹图谱的测定：吸取供试品溶液、对照品溶液各10～30μL，分别注入液相色谱仪，按照高效液相色谱法测定，得到色谱图；

其中色谱条件为：250mm×4.6mm，5μm的Comatex C18-AA柱；流动相：乙腈(A)-用磷酸调节pH为6-7的0.04％的三乙胺缓冲液(B)；梯度洗脱：0→100min，A的体积百分比10％→60％；流速1ml/min，检测波长210～230nm，柱温20～40℃，进样量10～30μL。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，方法如下：

(1)对照品溶液的制备：称取苦参碱4.08mg、槐果碱5.02mg，置于10ml量瓶中，加入甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得苦参碱0.408mg/ml、槐果碱0.502mg/ml的混合对照品溶液；

(2)供试品溶液的制备：精密称取百草妇炎清栓样品5g，置水浴上使熔化，加0.3ml氨水，加硅藻土10g，研匀，精密加氯仿50ml，超声30min，补重，过滤，取滤液20ml，蒸干，残渣用甲醇溶解并定容至10ml，过0.45μm微孔滤膜，作为供试品；

(3)百草妇炎清栓指纹图谱的测定：精密吸取供试品溶液、对照品溶液各20μL，分别注入液相色谱仪，按照高效液相色谱法测定，记录80min的色谱图；

其中色谱条件为：250mm×4.6mm，5μm的Comatex C18-AA柱；流动相：乙腈(A)-用磷酸调节pH为6.5的0.04％的三乙胺缓冲液(B)；梯度洗脱：0→100min，A的体积百分比10％→60％；流速1ml/min，检测波长220nm，柱温30℃，进样量20μL。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱仪使用的检测器为二极管阵列检测器。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，色谱图中2号峰为苦参碱，3号峰为槐果碱。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，色谱图中共有13个共有峰。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，以2号峰作为参比峰计算，所述共有峰的相对保留时间分别为1号峰；0.371～0.390，2号峰：1.000，3号峰：1.162～1.242，4号峰：1.445～1.738，5号峰：1.718～1.992，6号峰：1.882～2.184，7号峰：2.248～2.606，8号峰：2.794～3.236，9号峰：2.997～3.472，10号峰：3.183～3.684，11号峰：3.561～4.123，12号峰：3.75～4.390，13号峰：3.934～4.601。