[发明专利]一种提高利迪链菌素产量的方法

说明书

技术领域

本发明属于工业微生物领域，涉及一种增加发酵过程中利迪链菌素产量的方法。

背景技术

利迪链菌素为典型的Tetramic acid类抗生素,具有良好的抗细菌、抗肿瘤、抗HIV蛋白酶活性。最新研究表明,利迪链菌素是一个重要的RNA聚合酶抑制剂,相继在Cell和Mol Cell上有3篇相关论文论及,从而引起了广泛关注。提高次级代谢产物的水平是微生物新药研发过程及工业微生物发酵的一项重要研究任务，包括菌种改良和过程优化控制。国内外的文献资料显示，利迪链菌素的产量较低，影响了人们对利迪链菌素的深入研究与进一步开发利用。目前用于提高抗生素生产菌株产量的方法主要有定向诱变和随机诱变的方法，也有对菌株发酵条件进行优化，从而提高抗生素的产量。

发明内容

本发明的目的是提供一种有效提高发酵过程中利迪链菌素产量的方法。通过在发酵过程中添加脯氨酸，大幅增加利迪链菌素的生产水平。

本发明的技术方案概述如下：

一种提高发酵中利迪链菌素产量的方法，包括如下步骤：

（1）培养基和氨基酸母液的配制：

①种子培养基：淀粉10～100g，葡萄糖1～10g，酵母浸粉1～10g，蛋白胨1～10g，MgSO₄·7H₂O0.1～5g，NaCl0.1～5g，K₂HPO₄0.1～5g，加水定容至1L，121℃蒸汽灭菌20min；

②发酵培养基：淀粉10～100g，葡萄糖1～10g，蛋白胨1～10g，MgSO₄·7H₂O0.1～5g，NaCl0.1～5g，K₂HPO₄0.1～10g，加水定容至1L，121℃蒸汽灭菌20min；

③脯氨酸母液：称取0.1～5g脯氨酸，用超纯水定容至50～500mL,通过0.1～0.45μm的无菌过滤器，得无菌脯氨酸母液；

（2）种子培养：将利迪链霉菌（Streptomyces lydicus）在种子培养基中培养，得到一级种子；将一级种子在种子培养基中培养，得到二级种子；

（3）添加脯氨酸发酵：将100～700ml所述二级种子在3000～6000rpm离心3～20min，得到菌丝体，用100～700ml发酵培养基重悬菌丝体，然后按体积比为10%～30%的接种密度接种到装有发酵培养基的发酵罐中，再加入50～500ml脯氨酸母液，在搅拌转速为200～600rpm，通气量为1～3vvm，pH为6～8的条件下，发酵80～150h，得发酵液；

（4）利迪链菌素含量测定：

取发酵液在4～30℃，转速为8000～15000rpm，离心5～20min，收集上清液，过0.1～0.45μm滤器，得滤液；测定利迪链菌素含量。

本发明的优点：

本发明通过在发酵过程中的脯氨酸添加，大幅提高发酵过程中利迪链菌素的产量，从而为利迪链菌素的进一步研究和应用奠定基础。

附图说明

图1为表征利迪链霉菌E9添加脯氨酸发酵过程中的葡萄糖消耗图。

图2为表征利迪链霉菌E9添加脯氨酸发酵过程中的利迪链霉菌生物量图。

图3为表征利迪链霉菌E9添加脯氨酸发酵过程中的利迪链菌素产量累积图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步说明：

本发明是以利迪链霉菌（Streptomyces lydicus）E9CGMCC No.3075和利迪链霉菌(Streptomyces lydicus)NRRL2433(ATCC No.25470)为例进行说明，但并不对本发明作任何限定，实验证明，用其它产利迪链菌素的菌株也可以完成本发明。

利迪链霉菌（Streptomyces lydicus）E9已由2009年5月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为：北京市朝阳区大屯路，中国科学院微生物研究所，利迪链霉菌（Streptomyces lydicus）E9的编号为：CGMCC No.3075。

实施例1

（1）培养基和氨基酸母液的配制：

①种子培养基：淀粉30g，葡萄糖5g，酵母浸粉2g，蛋白胨4g，MgSO₄·7H₂O0.5g，NaCl0.5g，K₂HPO₄1.5g，加水定容至1L，121℃蒸汽灭菌20min；