[发明专利]一种正品半夏的检测方法有效

专利信息
申请号: 201310019316.0 申请日: 2013-01-18
公开(公告)号: CN103048373A 公开(公告)日: 2013-04-17
发明(设计)人: 李敏;卢道会;杨小艳 申请(专利权)人: 成都中医药大学
主分类号: G01N27/447 分类号: G01N27/447
代理公司: 成都高远知识产权代理事务所(普通合伙) 51222 代理人: 李高峡;张娟
地址: 611137 四川*** 国省代码: 四川;51
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摘要:
搜索关键词: 一种 正品 半夏 检测 方法
【权利要求书】:

1.一种正品半夏的检测方法,其特征在于:包括如下步骤:

(1)取待检样品,加1~3倍重量的水,水温0℃~5℃,匀浆,离心,得上清液;

(2)用SDS-PAGE电泳方法检测步骤(1)的上清液,其在Rm值0.208、0.232、0.312、0.335、0.383、0.405、0.429、0.491、0.615、0.85和/或0.897有谱带,所述电泳的浓缩胶浓度为5%,分离胶浓度为12%。

2.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于:步骤(1)中,所述水为待检样品重量的2倍;所述离心为2000r/min离心2min。

3.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于:步骤(2)中,所述上清液在Rm值0.208、0.232、0.312、0.335、0.383、0.405、0.429、0.491、0.615、0.85和0.897有谱带。

4.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于:所述步骤(2)包含如下步骤:

1)将上清液加入0.1~1倍体积样品缓冲液,混匀,离心,得上样液,所述样品缓冲液是1mol/l Tris-HCl缓冲液,且添加有0.03mol/l溴酚蓝和0.15mol/l SDS;

2)取步骤1)的上样液上样,电泳,固定,染色,洗脱即可,所述电泳缓冲液为Tris-甘氨酸缓冲液。

5.根据权利要求4所述的检测方法,其特征在于:步骤1)中,所述样品缓冲液为上清液的0.1倍;所述上清液与样品缓冲液混匀之后,先在沸水中加热3min,再离心;所述离心是4000r/min离心30s。

6.根据权利要求4所述的检测方法,其特征在于:步骤1)中,所述样品缓冲液还添加有20%(v/v)甘油和10%(v/v)β-巯基乙醇。

7.根据权利要求4所述的检测方法,其特征在于:步骤2)中,所述固定采用的固定液为10%(w/w)三氯醋酸溶液;所述染色采用的染色液为考马氏亮蓝染色液;所述洗脱采用的洗脱液为考马氏亮蓝洗脱液。

8.根据权利要求7所述的检测方法,其特征在于:所述染色是:用考马氏亮蓝染色液浸泡凝胶,50~60℃水浴加热15min,并不断振荡,冷却后倾去染色液。

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