[发明专利]一种正品半夏的检测方法有效
| 申请号: | 201310019316.0 | 申请日: | 2013-01-18 |
| 公开(公告)号: | CN103048373A | 公开(公告)日: | 2013-04-17 |
| 发明(设计)人: | 李敏;卢道会;杨小艳 | 申请(专利权)人: | 成都中医药大学 |
| 主分类号: | G01N27/447 | 分类号: | G01N27/447 |
| 代理公司: | 成都高远知识产权代理事务所(普通合伙) 51222 | 代理人: | 李高峡;张娟 |
| 地址: | 611137 四川*** | 国省代码: | 四川;51 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 一种 正品 半夏 检测 方法 | ||
1.一种正品半夏的检测方法,其特征在于:包括如下步骤:
(1)取待检样品,加1~3倍重量的水,水温0℃~5℃,匀浆,离心,得上清液;
(2)用SDS-PAGE电泳方法检测步骤(1)的上清液,其在Rm值0.208、0.232、0.312、0.335、0.383、0.405、0.429、0.491、0.615、0.85和/或0.897有谱带,所述电泳的浓缩胶浓度为5%,分离胶浓度为12%。
2.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于:步骤(1)中,所述水为待检样品重量的2倍;所述离心为2000r/min离心2min。
3.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于:步骤(2)中,所述上清液在Rm值0.208、0.232、0.312、0.335、0.383、0.405、0.429、0.491、0.615、0.85和0.897有谱带。
4.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于:所述步骤(2)包含如下步骤:
1)将上清液加入0.1~1倍体积样品缓冲液,混匀,离心,得上样液,所述样品缓冲液是1mol/l Tris-HCl缓冲液,且添加有0.03mol/l溴酚蓝和0.15mol/l SDS;
2)取步骤1)的上样液上样,电泳,固定,染色,洗脱即可,所述电泳缓冲液为Tris-甘氨酸缓冲液。
5.根据权利要求4所述的检测方法,其特征在于:步骤1)中,所述样品缓冲液为上清液的0.1倍;所述上清液与样品缓冲液混匀之后,先在沸水中加热3min,再离心;所述离心是4000r/min离心30s。
6.根据权利要求4所述的检测方法,其特征在于:步骤1)中,所述样品缓冲液还添加有20%(v/v)甘油和10%(v/v)β-巯基乙醇。
7.根据权利要求4所述的检测方法,其特征在于:步骤2)中,所述固定采用的固定液为10%(w/w)三氯醋酸溶液;所述染色采用的染色液为考马氏亮蓝染色液;所述洗脱采用的洗脱液为考马氏亮蓝洗脱液。
8.根据权利要求7所述的检测方法,其特征在于:所述染色是:用考马氏亮蓝染色液浸泡凝胶,50~60℃水浴加热15min,并不断振荡,冷却后倾去染色液。
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