[发明专利]一种利拉鲁肽的固相合成方法

说明书

技术领域本发明涉及制药技术领域，尤其是涉及合成利拉鲁肽的方法。 

背景技术

II型糖尿病是一种常见的慢性疾病，目前常用的口服治疗药物包括：双胍类、磺脲类、α-葡萄糖苷酶抑制剂、噻唑烷二酮类， DPP-4抑制剂等。对于口服降糖药效果不好的患者，常采用联合胰岛素治疗。由于目前的治疗方案大多侧重于对血糖的控制，而忽略了对胰岛功能的保护，多数患者最终会出现β细胞功能严重衰退，机体胰岛素敏感性逐渐下降，无论采用饮食控制、二甲双胍还是磺脲类药物，对β细胞受损速度均无影响。利拉鲁肽属于新型降糖药GLP-1类似物，多项试验证明此类药物可以刺激胰岛β细胞的增殖、分化及抑制凋亡作用，这就意味着糖尿病的病情得到明显缓解，是II型糖尿病治疗领域的一个革命性的突破。 

利拉鲁肽是根据天然的GLP-1(7-37)序列合成的药物，其氨基酸序列为：His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys*(gGlu-棕榈酸)-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly。与GLP-1有95%的同源性，保留了GLP-1(7-37) 的生物活性，其分子结构与天然GLP-1分子不同的是第34位赖氨酸被精氨酸取代，第26位赖氨酸上增加一个由g谷氨酸连接的16碳棕榈酰脂肪酸侧链，使其在体内与血浆白蛋白结合后形成可逆的药物-白蛋白复合体，复合体不易被降解，还可以缓慢释放药物使分布时间延长，克服了天然GLP-1(7-37) 易降解的缺点，半衰期达到13小时。 

利拉鲁肽由丹麦诺和诺德公司研制，其母链是利用基因重组技术生产，再侧链缩合谷氨酸和棕榈酸。2010年1月25日美国食品与药物管理局批准利拉鲁肽在美国上市。2011年10月9日在我国上市。诺和诺德公司制备利拉鲁肽的方法技术难度大，成本及设备要求高，US6458924B2和US6268343B1报道的合成方法中间体需要用液相纯化，步骤繁琐副反应多，并且产生的废液不好处理，试剂使用成本也高。国内报道的利拉鲁肽固相合成专利方法（CN102286092）26位赖氨酸采用Fmoc-Lys(Alloc)-OH，而选择性脱除Alloc需要重金属催化剂Pd(Ph3P)4，一般需要氮气保护下反应，在工业上生产会受到限制。本发明26位赖氨酸采用Fmoc-Lys(Mtt)-OH或Fmoc-Lys(Mmt)-OH，Mtt/Mmt 的选择性保护只需要1%TFA/5%Tis在DCM中，简单易行，工业化生产也不受限制。本发明侧链的缩合采用简单易行的Fmoc-Glu-OtBu和棕榈酸的分步缩合得到利拉鲁肽，而CN102286092专利方法采用特殊的Palmiyoyl-Glu-OtBu试剂缩合侧链。 

  

发明内容

     本发明的目的在于提供一种反应步骤简单、所用试剂单一、条件温和、收率高成本低、能实现工业化生产的固相合成工艺，解决现有工艺的一些问题。 

    为实现上述目的，本发明采取如下技术方案： 

    一种利拉鲁肽的固相合成方法，包括如下步骤：

1）选择Fmoc-Gly-Wang树脂，利用N端具有Fmoc保护和侧链保护的氨基酸为原料，按照利拉鲁肽直链的氨基酸序列从第二个精氨酸开始到第31个组氨酸逐步偶联。26位上的赖氨酸采用的是Fmoc-Lys(Mtt)-OH或Fmoc-Lys(Mmt)-OH，N-末端的组氨酸采用的是Boc-His(Trt)-OH或Boc-His(Boc)-OH。

2）1%TFA选择脱除赖氨酸上的Mtt/Mmt保护基。 

3）侧链上依次偶联一个g-谷氨酸和棕榈酸。 

4）TFA切割树脂得到利拉鲁肽粗品，制备型液相纯化、冻干得到纯品。