[发明专利]一种通过染色体加倍诱变和筛选小球藻高产新种质的方法

权利要求书

1.一种通过染色体加倍诱变和筛选创造小球藻高产新种质的方法，包括以下步骤：

（1）前培养：对液体原藻种进行诱变前的活化适应培养；

（2）诱变处理：配制小球藻诱变剂梯度浓度培养液，培养不同时间进行诱变处理；

（3）初筛和恢复培养：每一时间水平诱变处理结束后，在培养液中进行恢复培养，分别筛选小球藻浓度峰值出现时间最早和峰值最大的实验组；

（4）优势突变型小球藻纯藻株的筛选和纯化培养：运用涂布平板法，将初筛获得的小球藻转接到固体分离培养基进行分离培养，筛选优势突变藻株并进行连续多代的纯化培养；

（5）对分离的优势突变小球藻株进行生理性能检测。

2.根据权利要求1所述的通过染色体加倍诱变和筛选创造小球藻高产新种质的方法，其特征在于，其中步骤（1）所述的前培养条件是：原藻种于27 ℃±1 ℃、光照强度30001ux、光照周期12h∶12h条件下液体培养至稳定期。

3.根据权利要求1所述的通过染色体加倍诱变和筛选创造小球藻高产新种质的方法，其特征在于，其中步骤（2）所述的诱变处理方法是：在HB-4培养液中添加不同浓度秋水仙碱，制成0.01%、0.02%、0.03%、0.04%、0.05%、0.06% 6个浓度梯度的小球藻诱变培养液，接种原藻种后于温度27 ℃±1 ℃、140r/min、光照强度3000lux、光照周期12h∶12h条件下，分别培养6 h、12 h、24 h、36 h、48 h、60 h、72 h、84 h、96 h、120h。

4.根据权利要求1所述的通过染色体加倍诱变和筛选创造小球藻高产新种质的方法，其特征在于，其中步骤（3）所述的初筛和恢复培养方法是：诱变后的藻细胞接种到HB-4液体培养基于27℃±1 ℃、140～170r/min、光照强度30001ux、光照周期为12h∶12h、通气条件下恢复培养，以OD_530nm峰值出现最早和峰值最大的实验组为优势突变组。

5.根据权利要求1所述的通过染色体加倍诱变和筛选创造小球藻高产新种质的方法，其特征在于，其中步骤（4）所述的优势突变型小球藻纯藻株的筛选和纯化培养方法为：在HB-5固体分离培养基上，挑选色泽浓绿、半径大的藻株群落，转接到试管内HB-4固体斜面培养基上纯化培养。

6.根据权利要求1所述的通过染色体加倍诱变和筛选创造小球藻高产新种质的方法，其特征在于，其中步骤（5）所述的优势突变小球藻株生理性能检测是按下列指标进行：

①小球藻核及叶绿体DNA含量检测；

②小球藻叶绿素含量检测；

③小球藻稳定期藻细胞浓度测定；

④小球藻胞内可溶性蛋白质含量鉴定；

⑤小球藻水质净化效能鉴定。